Please use this identifier to cite or link to this item: http://cuir.car.chula.ac.th/handle/123456789/44923
Title: การผลิตและกิจกรรมของรีคอมบิแนนท์เอนไซม์ไฮยาลูโรนิเดสจาก Streptococcus pyogenes ATCC 6550 ใน Escherichia coli JM 109
Other Titles: Production and activity of recombinant hyaluronidase from Streptococcus pyogenes ATCC 6550 in Escherichia Coli JM 109
Authors: สิทธิศักดิ์ เถาสุวรรณ
Advisors: ชุติมณฑน์ สถิรพิพัฒน์กุล
ศรีเมฆ ชาวโพงพาง
Other author: จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย. คณะวิศวกรรมศาสตร์
Advisor's Email: Chutimon.S@Chula.ac.th
ไม่มีข้อมูล
Subjects: สเตรปโตค็อกคัสไพโอจีเนส
อาหารเลี้ยงเชื้อ
เอนไซม์
Streptococcus pyogenes
Enzymes
Culture media (Biology)
Issue Date: 2555
Publisher: จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย
Abstract: การศึกษาการแสดงออกของยีนไฮยาลูโรนิเดส จาก Streptococcus pyogenes ATCC 6550 ใน Escherichia coli JM109 เมื่อใช้ pQE80-L vector system พบว่า มีขนาดของยีนประมาณ 2,400 คู่เบส โดยรีคอมบิแนนท์โปรตีนทำการตรวจสอบขนาดโมเลกุลด้วยเทคนิค SDS-PAGE พบว่าในสารละลายเซลล์มีขนาดโมเลกุลประมาณ 88 กิโลดาลตัน โดยเอนไซม์ไฮยาลูโรนิเดสที่แยกได้จากสารละลายตะกอนเซลล์ ถูกตรวจวัดได้ในระดับที่สูงกว่าเมื่อเปรียบเทียบกับเอนไซม์จาก supernatant เมื่อทำการศึกษาปัจจัยที่มีผลต่อการเลี้ยงของการผลิตเอนไซม์ไฮยาลูโรนิเดสโดยเชื้อสายพันธุ์นี้ในระดับขวดเขย่า พบว่า สภาวะที่เหมาะสมต่อการเพาะเลี้ยงเชื้อในอาหารเลี้ยงเชื้อ 2xYT ที่มีปริมาตรของอาหารเลี้ยงเชื้อต่อปริมาตรขวดเขย่า 40 เปอร์เซ็นต์ คือ ที่อุณหภูมิ.35 องศาเซลเซียส ที่ค่าความเป็นกรด-ด่าง 8 และ 200 รอบการเขย่าต่อนาที สารละลายเอนไซม์ที่ไม่ทำให้บริสุทธิ์ แสดงค่ากิจกรรมสูงสุดในช่วงอุณหภูมิ 35.ถึง.40 องศาเซลเซียส ที่ค่าความเป็นกรด-ด่าง 7 การศึกษาจลนพลศาสตร์ของเอนไซม์ที่สภาวะค่าความเป็นกรด-ด่าง 7 และอุณหภูมิ.37 องศาเซลเซียส ด้วยวิธี Morgan-Elson colourimetric assay พบว่า Km และ Vmax มีค่าเท่ากับ 0.78 มิลลิกรัมต่อมิลลิลิตร และ 9.3 มิลลิยูนิตต่อมิลลิลิตร จาก Lineweaver–Burk plot
Other Abstract: The expression of hyaluronidase gene from Streptococcus pyogenes ATCC 6550 in Escherichia coli JM109 by using pQE80-L vector system was encoded at approximately 2,400 bp. The recombinant protein detected by SDS-PAGE had an expressed molecular mass of ~88 kDa size in the soluble cell. Hyaluronidase extracted from the soluble crude cell was detected in higher level, compared to the enzyme from supernatant. The effects of cultivation parameters on the production of hyaluronidase by this strain in shaking-flask level were investigated. The optimum cultivation conditions in 2xYT medium at 40% volume of medium per flask volume ratio were observed at 35 °C, pH = 8 and 200 rpm. The crude enzyme showed maximum activity at the temperature ranging from 35 °C to 40 °C with the pH of 7. The kinetics of enzyme was investigated at pH = 7 and 37°C using the Morgan-Elson colourimetric assay method. Km and Vmax values were 0.78 mg/ml and 9.3 mU/ml from the Lineweaver–Burk plot.
Description: วิทยานิพนธ์ (วศ.ม.)--จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย, 2555
Degree Name: วิศวกรรมศาสตรมหาบัณฑิต
Degree Level: ปริญญาโท
Degree Discipline: วิศวกรรมเคมี
URI: http://cuir.car.chula.ac.th/handle/123456789/44923
Type: Thesis
Appears in Collections:Eng - Theses

Files in This Item:
File Description SizeFormat 
sittisak_th.pdf2.27 MBAdobe PDFView/Open


Items in DSpace are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.