Please use this identifier to cite or link to this item: http://cuir.car.chula.ac.th/handle/123456789/58708
Title: โครงการวิจัยเรื่อง การผลิตโมโนโคลนอลแอนติบอดีต่อเซมิคาร์บาไซด์ : รายงานการวิจัย ปีที่ 1
Other Titles: Production of monoclonal antibody against semicarbazide
Authors: อณุมาศ บัวเขียว
ทรงจันทร์ ภู่ทอง
กิตตินันท์ โกมลภิส
นันทิกา คงเจริญพร
อุมาพร พิมพิทักษ์
Email: Anumart.B@Chula.ac.th
Songchan.P@Chula.ac.th
Kittinan.K@Chula.ac.th
Nanthika.K@Chula.ac.th
Umaporn.P@Chula.ac.th
Other author: จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย. สถาบันวิจัยเทคโนโลยีชีวภาพและวิศวกรรมพันธุศาสตร์
Subjects: โมโนโคลนอลแอนติบอดีย์
ไนโตรฟูแรน
ปฏิชีวนะตกค้าง
การปนเปื้อนในอาหาร
เซมิคาร์บาไซด์
Monoclonal antibodies
Nitrofurans
Antibiotic residues
Food contamination
Semicarbazide
Issue Date: 2557
Publisher: จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย
Abstract: ไนโตรฟูราโซน (Nitrofurazone ,NFZ) เป็นยาในกลุ่มสารไนโตรฟูแรนที่เกษตรกรนิยมใช้ในการป้องกันและรักษาโรคเกี่ยวกับระบบทางเดินอาหารในสัตว์เพื่อการบริโภค ได้แก่ โค ,สุกร ,ไก่ ,ปลา และกุ้ง ยานี้เมื่อเข้าสู่ร่างกายจะถูกเปลี่ยนเป็นสารเมแทบอไลต์ คือ เซมิคาร์บาไซด์ (Semicarbazide ,SEM) ติดกับเนื้อเยื่อ อาจเป็นสารก่อมะเร็งและก่อให้เกิดกลายพันธุ์ งานวิจัยนี้ได้ทำการผลิตโมโนโคลนอลแอนติบอดีต่อสาร SEM หรือ สารอนุพันธ์ NPSEM ซึ่งเป็นรูปสารสำหรับการตรวจหาสารตกค้างในเนื้อสัตว์ โดยการฉีดกระตุ้นหนูทดลองด้วยอนุพันธ์ CPSEM ที่เชื่อมต่อด้วย BSA (CPAOZ-BSA) จากผลการทดลองที่ได้ พบว่า CPSEM-BSA สามารถที่จะใช้เป็นแอนติเจนในการกระตุ้นภูมิคุ้มกันของหนูทดลอง เพราะสามารถผลิตไฮบริโดมาโคลนที่ผลิตแอนติบอดี ซึ่งมีความสามารถในการจับกับสาร NPSEM และ NFZ ในรูปอิสระได้ จากการคัดเลือกไฮบริโดมาเซลล์โคลนที่ผลิตแอนติบอดีต่อสาร NPSEM มีจำนวน 22 โคลน โดยเป็นโคลนจากเซลล์หลุมต้น 11/10G และ 12/1A ซึ่งโมโนโคลนอลแอนติบอดีที่ได้นี้ ทุกโคลนสามารถจับกับ NFZ ซึ่งเป็นยาตั้งต้น และ NPSEM ในรูปอนุพันธ์ สำหรับใช้ตรวจหาสารตกค้าง โคลนที่ได้จากเซลล์หลุมต้น 11/10G จะสามารถจับกับ NPSEM ได้ดีกว่าโคลนที่ได้จากเซลล์หลุมต้น 12/1A และแอนติบอดีที่ได้เป็นชนิด IgG₃ ส่วนโคลนที่ได้จากเซลล์หลุมต้น 12/1A เป็นชนิด IgG₃ และ IgM จากโคลนที่ได้เหล่านี้จึงทำการคัดเลือกโคลน 3 โคลน จากเซลล์หลุมต้น 11/10G และ 12/1A โดยเลือกจากโคลนที่สามารถจับกับ NPSEM ได้ดี คือ มีค่า IC₅₀ ต่ำที่สุด ได้แก่ โคลนหมายเลข 8 และ 43 จากเซลล์หลุมต้น 11/10G ซึ่งมีค่า IC₅₀ เท่ากับ 13.9 และ 13.1 นาโนกรัมต่อมิลลิลิตร ตามลำดับ และเลือกโคลนหมายเลข 25 จากเซลล์หลุมต้น 12/1A ซึ่งจับกับ NFZ ได้ดี มีค่า IC₅₀ เท่ากับ 145.2 นาโนกรัมต่อมิลลิลิตร เพื่อทำการผลิตเพิ่มจำนวนโมโนโคลนอลแอนติบอดีและทำให้บริสุทธิ์ เพื่อใช้ในการศึกษาต่อไป
Other Abstract: Nitrofurazone (NFZ) is a nitrofuran drug which is widely used in prevention and treatment of animals such as cattle, swine, chicken, fish and shrimp, for consumption. When NFZ enters the body, it is metabolized to semicarbazide (SEM) which attached to the tissue and is considered to be a carcinogen and mutagen. In this research, monoclonal antibody against SEM or its nitrophenyl derivative (NPSEM) which is the stabilized form for residue detection was produced. Immunization of mice was performed by using the carboxyphenyl derivative-bovine serum albumin conjugate (CPSEM-BSA) as the antigens. The results suggested that CPSEM-BSA could induce hybridoma clone which produce antibodies with binding ability to NPSEM, and NFZ. After screening, twenty-two hybridomas which produce antibody against NPSEM were selected from the originated well no. 11/10G and 12/1A. All antibodies could bind to NFZ and NPSEM. Clones from well no. 11/10G were better than those from well no. 12/1A in NPSEM-binding ability. After characterization, the isotype of antibody from well no. 11/10G and 12/1A was found to be IgG₃ and IgM, respectively. Three monoclones were selected based on their ability to bind with NPSEM as quantified in term of the 50% inhibition concentration value. Clone no. 8 and no. 43 were obtained from the originated well no. 11/10G while clone no. 25 was from the well no. 12/1A. Their IC₅₀ values were 13.9, 13.1 and 145 nanogram per millilitre, respectively. Monoclonal antibodies from the selected clones will be produced and partially purified for further studies.
URI: http://cuir.car.chula.ac.th/handle/123456789/58708
Type: Technical Report
Appears in Collections:Biotec - Research Reports

Files in This Item:
File Description SizeFormat 
Anumart bu_19739680.pdf716.26 kBAdobe PDFView/Open


Items in DSpace are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.