Please use this identifier to cite or link to this item: http://cuir.car.chula.ac.th/handle/123456789/60520
Title: การตรวจหาภาวะการเปลี่ยนแปลงการควบคุมเหนือพันธุกรรมในตัวอย่างเซลล์ปากมดลูกที่มีความผิดปกติระดับต่างๆ : รายงานการวิจัย
Other Titles: Detection of epigenetic changes in cervical samples with different lesions severity
Authors: อาคม ไชยวงศ์คต
ภาวพันธ์ ภัทรโกศล
สมชัย นิรุตติศาสน์
Email: Arkom.Cha@chula.ac.th
Parvapan.B@Chula.ac.th
ไม่มีข้อมูล
Other author: จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย. คณะแพทยศาสตร์
Subjects: มดลูก -- มะเร็ง
Issue Date: 2559
Publisher: จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย
Abstract: โรคมะเร็งปากมดลูกเป็นโรคมะเร็งที่พบมากเป็นอันดับสองในผู้หญิงทั่วโลก โดยเฉพาะในประเทศกำลังพัฒนา ซึ่งรวมประเทศไทยด้วย มีการศึกษาพบภาวะ global DNA hypomethylation ในเซลล์มะเร็งชนิดต่างๆ รวมถึงมะเร็งปากมดลูกด้วย การศึกษานี้จึงสนใจพัฒนาวิธี Enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) ในการตรวจ global DNA methylation เพื่อตรวจกรองมะเร็งปากมดลูกซึ่งวิธี ELISA เหมาะสมกับประเทศกำลังพัฒนา วิธีดำเนินการวิจัย การศึกษานี้พัฒนาวิธี ELISA ในการตรวจ global DNA methylation พร้อมเปรียบเทียบผลกับวิธี bisulfite LINE1 pyrosequencing โดยใช้ตัวอย่างดีเอ็นเอที่สกัดจากเซลล์ปากมดลูกที่มีความผิดปกติระดับต่างๆ ผลการวิจัย โดยวิธี ELISA วัดค่าการดูดกลืนแสงที่ความยาวคลื่น 405 nm ณ เวลา 40 นาที พบค่า global DNA methylation ในเซลล์มะเร็งชนิดต่างๆได้ค่าร้อยละดังนี้ Caski คือ 3.72 SiHa คือ 1.74 HeLa คือ 2.42 ME180 คือ 4.79 MS751 คือ 5.09 และ C33A คือ 1.47 และจากเม็ดเลือดขาวจากคนปกติได้ค่าคือ 8.20 ผลการตรวจ LINE1 methylation โดยวิธี pyrosequencing ได้ค่าดังนี้ Caski ร้อยละ 45 SiHa ร้อยละ 35 และเม็ดเลือดขาวจากคนปกติได้ค่าคือ ร้อยละ 62 สำหรับผลตรวจ global DNA methylation ในตัวอย่างเซลล์ปากมดลูก 161 ตัวอย่าง โดยวิธี LINE1 pyrosequencing ได้ค่าดังนี้ Normal ร้อยละ 55.6 cervical intraepithelial lesion 1 (CIN1) ร้อยละ 56.8 CIN2-3 ร้อยละ 57.3 และมะเร็งปากมดลูกร้อยละ 48.8 พบว่าค่าเฉลี่ยของมะเร็งมีความแตกต่างกับระดับอื่นอย่างมีนัยสำคัญทางสถิติ (p<0.05) ผลตรวจโดยวิธี ELISA ในตัวอย่าง 100 ตัวอย่าง มีค่าดังนี้ Normal ร้อยละ 4.50 CIN1 ร้อยละ 3.83 CIN2-3 ร้อยละ 2.83 และมะเร็งปากมดลูกร้อยละ 3.03 พบว่าค่าเฉลี่ยของมะเร็งมีความแตกต่างกับระดับอื่นอย่างมีนัยสำคัญทางสถิติ (p<0.05) วิจารณ์ผลการวิจัย พบว่าในเซลล์มะเร็งมีภาวะ global DNA hypomethylation เมื่อเปรียบเทียบกับเซลล์ปกติ แต่ยังพบปัญหาการจับของดีเอ็นเอบนพื้นผิวสไลด์ในการทำ ELISA ทำให้ได้ค่าร้อยละของการเกิด global DNA methylation โดยวิธี ELISA ในระดับต่ำมากเมื่อเทียบกับวิธี LINE1 pyrosequencing จึงควรทำการพัฒนาเทคนิค ELISA เพิ่มเติมเพื่อให้ผลการวิจัยที่น่าเชื่อถือ
Other Abstract: Introduction; Cervical cancer is the second most cancer found in women worldwide especially in developing countries including Thailand. Previous reports showed that global DNA hypomethylation is found in many types of cancer including cervical cancer. We aimed to develop enzyme linked immuno sorbent assay (ELISA) for detection of global DNA methylation in order to screening of cervical cancer in low resource countries. Materials and methods; ELISA assay was developed and the results obtained from ELISA assay were compared to bisulfite LINE1 methylation by pyrosequencing. DNA extracted from cervical cells with different lesions severity were used. Results; ELISA plate was read at 405 nm within 40 min, the percentage of global DNA methylation in cervical cancer cell lines were 3.72 (Caski), 1.74 (SiHa), 2.42 (HeLa), 4.79 (ME189), 5.09 (MS751), 1.47 (C33A) and 8.20 of white blood cells collected from normal population. Bisulfite LINE1 pyrosequencing were 45% of Caski, 35% of SiHa and 62% of normal white blood cells. Mean of global DNA methylation by pyrosequencing in 161 cervical samples were as followed; 55.6% of normal, 56.8% of CIN1, 57.3% of CIN2-3 and 48.8% of cervical cancer, there was significant difference among groups (p<0.05). By ELISA assay in 100 cervical samples, 4.50% of Normal, 3.83 of CIN1, 2.83% of CIN2-3 and 3.03% of cervical cancer, there was significant difference among groups (p<0.05). Discussion; Global DNA hypomethylation was significantly found in cervical cancer compared to normal cervical cells. Problem of ELISA assay is the binding affinity of DNA on ELISA plate leading to the low percentage of global DNA methylation when compared to LINE1 pyrosequencing assay. ELISA assay must be further developed and evaluated in clinical samples for reliable results.
URI: http://cuir.car.chula.ac.th/handle/123456789/60520
Type: Technical Report
Appears in Collections:Med - Research Reports

Files in This Item:
File Description SizeFormat 
Arkom C_Res_2559.pdf999.69 kBAdobe PDFView/Open


Items in DSpace are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.