Please use this identifier to cite or link to this item: http://cuir.car.chula.ac.th/handle/123456789/6099
Title: การผลิตโพลีโคลนอลแอนติบอดี้ที่มีความจำเพาะต่อโปรตีน ของระบบมัลติดรักซ์อิฟรักซ์ในเชื้อสูโดโมนาส แอรูจิโนซา : รายงานผลการวิจัย
Other Titles: Preparation of specific-polyclonal antibodies against protein of multidrug efflux systems in pseudomonas aeruginosa
Authors: รุ่งทิพย์ ชวนชื่น
อินทิรา กระหม่อมทอง
Email: rchuanchuen@yahoo.com
ไม่มีข้อมูล
Other author: จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย. คณะสัตวแพทยศาสตร์
จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย. คณะสัตวแพทยศาสตร์
Subjects: ซูโดโมนาสแอรูจิโนซา
การดื้อยา
โพลีโคลนอลแอนติบอดีย์
Issue Date: 2549
Publisher: จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย
Abstract: ระบบ Multidrug efflux systems ได้แก่ MexAB-OprM, MexCD-OprJ, MexEF-OprN และ MexXY เป็นกลไกสำคัญของการดื้อต่อยาหลายชนิดพร้อมกันในสูโดโมนาส แอรูจิโนซา ในการวิจัยครั้งนี้ได้ผลิตโพลีโคลนอลแอนติบอดี้ต่อ OprM OprN และ OprJ เพื่อใช้ตรวจการแสดงออกของระบบด้วยเทคนิค Western blot analysis โดยฉีดกระตุ้นภูมิคุ้มกันในกระต่ายด้วยเปปไตด์สังเคราะห์ ทำการทดสอบคุณภาพของไฮเปอร์อิมมูนซีรั่มด้วยการทำ Western blot โดยใช้โปรตีนที่เตรียมได้จากเชื้อที่มีและไม่มีการแสดงออกของระบบที่เกี่ยวข้องเป็นตัวควบคุมบวกและตัวควบคุมลบ จากผลการวิจัยพบว่าโพลีโคลนอลแอนติบอดี้ที่ผลิตได้สามารถใช้ตรวจหาการแสดงออกของ OprM OprN และ OprJ ในการทดสอบปฏิกิริยาข้าม พบว่า OprJ polyclonal antibody ให้แถบขนาดประมาณ 53 Mda ต่อโปรตีนจาก OCR1 และ PAO7H ควรศึกษาเพิ่มเติมว่าเป็นปฏิกิริยาข้ามกับ OprM และ OprN จริงหรือไม่ รวมทั้งควรมีการสกัดโพลีโคลนอลแอนติบอดีให้บริสุทธิ์เพื่อเพิ่มความเข้มข้นและความจำเพาะ นอกจากนี้ได้สร้าง delta(mexXY) null mutant ที่สามารถใช้เป็นตัวควบคุมลบสำหรับการทดสอบการแสดงออกของ MexX ได้อย่างมีประสิทธิภาพ
Other Abstract: The multidrug efflux systems including MexAB-OprM, MexCD-OprJ, MexEF-OprN, and MexXY are the main responsible mechanisms for resistance to multiple antimicrobial agents in Pseudomonas aeruginosa. In this study, polyclonal antisera against OprM, OprN and OprJ were generated for determination of expression by Western blot analysis. The rabbit hyperimmune antisera were raised by injecting specific ioligopeptides and the quality was determined by Western blots. Whole cell protein prepared from the strains overproducing and lacking the coresponsed outer membrane proteins were used as positive and negative control, repectively. The results showed that rabbit polyclonal antisera generated could be used to determine expression of OprM, OprN, and OprJ. In cross-reactivity test, OprJ polyclonal antisera yield ~53 Mda bands in both OCR1 and PA07H. Further studies are suggested to prove if they were from cross-reaction with OprM and OprN. Polyclonal antibodies should be further purified to increase concentration and specificity. In addition, delta(mexXY) null mutant was constructed and efficiently used as a negative control in MexX detection assay.
URI: http://cuir.car.chula.ac.th/handle/123456789/6099
Type: Technical Report
Appears in Collections:Vet - Research Reports

Files in This Item:
File Description SizeFormat 
Rungthip.pdf1.34 MBAdobe PDFView/Open


Items in DSpace are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.