การทำให้บริสุทธิ์และลักษณะสมบัติของแอลฟา-แอล-อะราบิโนฟิวราโนสิเดสจาก Streptomyces sp. PC22

ปิ่นปัญญา เรียงรุ่งโรจน์

Please use this identifier to cite or link to this item: https://cuir.car.chula.ac.th/handle/123456789/11902

Full metadata record

DC Field	Value	Language
dc.contributor.advisor	ไพเราะ ปิ่นพานิชการ	-
dc.contributor.author	ปิ่นปัญญา เรียงรุ่งโรจน์	-
dc.contributor.other	จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย. คณะวิทยาศาสตร์	-
dc.date.accessioned	2009-12-28T07:26:08Z	-
dc.date.available	2009-12-28T07:26:08Z	-
dc.date.issued	2549	-
dc.identifier.isbn	9741425244	-
dc.identifier.uri	http://cuir.car.chula.ac.th/handle/123456789/11902	-
dc.description	วิทยานิพนธ์ (วท.ม.)--จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย, 2549	en
dc.description.abstract	ศึกษาการทำแอลฟา-แอล-อะราบิโนฟิวราโนสิเดส ซึ่งเป็นหนึ่งในเอนไซม์ย่อยสายกิ่งของไซแลนให้บริสุทธิ์จาก Streptomyces sp. PC22 ที่เลี้ยงในอาหารเหลวที่มีไซแลนจากเปลือกข้าวโอ๊ตเป็นแหล่งคาร์บอน โดยการตกตะกอนลำดับส่วนด้วยแอมโมเนียมซัลเฟตความเข้มข้น 40-90% ตามด้วยทำคอลัมน์โครมาโทกราฟีบนแมคโครขเพรบ ดีอีเออี บิวทิลไฮโดรโฟบิค อินเตอร์แอคชัน และไฮดรอกซีอะปาไทด์ ได้เอนไซม์ที่มีความบริสุทธิ์เพิ่มขึ้นประมาณ 111 เท่า เหลือแอคติวิดีอยู่ 13.12% จากการวิเคราะห์น้ำหนักโมเลกุลโดยวิธีเจลฟิลเตรซันพบว่าเอนไซม์นี้มีน้ำหนักโมเลกุลประมรณ 317 กิโลดาลตัน และเมื่อวิเคราะห์โดยวิธีโซเดียมโดเดซิลซัลเฟตพอลิอะคริลาไมด์เจลอีเลคโทรโฟริซิส พบว่าเอนไซม์ประกอบด้วย 4 หน่วยย่อยที่มีน้ำหนักโมเลกุลเท่ากันคือ 79 กิโลดาลตัน จากการศึกษาสมบัติของแอลฟา-แอล-อะราบิโนฟิวราโนสิเดสบริสุทธิ์พบว่า เอนไซม์มีอุณหภูมิและความเป็นกรดด่างที่เหมาะสมต่อการทำงาน คือ 65 ํC และ 6.0 ตามลำดับ เอนไซม์มีความเสถียรต่ออุณหภูมิสูงถึง 45 ํC เป็นเวลา 30 นาที และเสถียรต่อความเป็นกรดด่างในช่วงกว้างตั้งแต่ 5.5-9.0 ค่า K และ V ต่อพารา-ไนโตรฟีนิล แอลฟา-แอล-อะราบิโนฟิวราโนไซด์ เท่ากับ 0.27 มิลลิโมลาร์ และ 3,926.15 ไมโครโมลต่อนาทีต่อมิลลิกรัมโปรตีน ตามลำดับ เอนไซม์ถูกยับยั้งในลักษณะแข่งขันโดยแอล-อะราบิโนส มีค่า K เท่ากับ 15.08 มิลลิโมลาร์ เอนไซม์ถูกยับยั้งอย่างสมบูรณ์ด้วยอิออนของปรอท นอกจากนี้ยังถูกยับยั้งด้วยเอ็น-โบรโมซักซินิไมด์และฟีนิลเมธิลซัลโฟนิบฟลูออไรด์ แสดงว่ากรดอะมิโนทริปโตเฟนและเซรีนเกี่ยวข้องกับบริเวณเร่งปฏิกิริยาของเอนไซม์ และจากการตรวจสอบแอคติวิตีข้างเคียงของแอลฟา-แอล-อะราบิโนฟิวราโนสิเดส พบว่าเอนไซม์ไม่มีแอคติวิตีของไซแลเนส, อะซีทิลเอสเทอเรสและบีตา-ไซโลสิเดสปนเปื้อน	en
dc.description.abstractalternative	Alfa-l-Arabinofuranosidase, one of xylan-debranching enzymes, was purified from the culture filtrate of streptomyces sp. PC22 grown in liquid medium containing oat spelt xylan as a carbon source. The enzyme was purified to approximately 111 folds with a recovery yield of 13.12% by fractionation with 40-90% saturation of ammonium sulfate followed by consecutive column chromatography on Macro-prep DEAE, butyl hydrophobic interaction and hydroxyapatite, respectively. The molecular weight of the purified enzyme was 317 kDa as estimated by gel filtration and composed of four identical subunits of 79 kDa estimated by SDS-PAGE. The enzyme had temperature and pH optima of 65 ํC and 6.0, respectively. It was stable to temperature up to 45 ํC for 30min and to a broad range of pH from 5.5-9.0. The K[subscript m] and V[subscript max] values of the enzyme for p-nitrophenyl alfa-l-arabinofuranoside were 0.27 mM and 3,926.15 mol/min/mg protein respectively. It was competitively inhibited by L-arabinose with K[subscript i] value of 15.08 mM. The enzyme activity was completely inhibited by Hg[superscript2+] and also inhibited by N-bromosuccinimide and phenylmethylsulfonyl fluoride indicating tryptophan and serine residue involved in catalytic mechanism. The purified enzyme did not exhibit xylanase, acetyl esterase and B-xylosidase acitivities.	en
dc.format.extent	1345319 bytes	-
dc.format.mimetype	application/pdf	-
dc.language.iso	th	es
dc.publisher	จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย	en
dc.rights	จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย	en
dc.subject	การย่อยสลายทางชีวภาพ	en
dc.subject	เอนไซม์	en
dc.subject	ไซแลน	en
dc.subject	สเตรปโตมัยซิส	en
dc.title	การทำให้บริสุทธิ์และลักษณะสมบัติของแอลฟา-แอล-อะราบิโนฟิวราโนสิเดสจาก Streptomyces sp. PC22	en
dc.title.alternative	Purification and characterization of alfa-l-arabinofuranosidase from streptomyces sp. PC22	en
dc.type	Thesis	es
dc.degree.name	วิทยาศาสตรมหาบัณฑิต	es
dc.degree.level	ปริญญาโท	es
dc.degree.discipline	จุลชีววิทยาทางอุตสาหกรรม	es
dc.degree.grantor	จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย	en
dc.email.advisor	Pairoh.P@Chula.ac.th	-
Appears in Collections:	Sci - Theses

Files in This Item:

File	Description	Size	Format
pinpunya.pdf		1.31 MB	Adobe PDF	View/Open

Show simple item record