Please use this identifier to cite or link to this item: http://cuir.car.chula.ac.th/handle/123456789/23913
Title: ภาวะเหมาะสมในการสร้างผักบุ้ง Ipomoea aquatica ดัดแปลงพันธุ์โดยวิธีการใช้ Agrobacterium tumefaciens
Other Titles: Opimal conditions for the construction of transgenic pakbung Ipomoea aquatica via Agrobacterium tumefaciens
Authors: กิตติมา คำหว่าน
Advisors: อัญชริดา อัครจรัลญา
Other author: จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย. คณะวิทยาศาสตร์
Issue Date: 2545
Publisher: Chulalongkorn University
Abstract: ภาวะที่เหมาะสมในการสร้างผักบุ้ง lpomoea aquatica ดัดแปลงพันธุ์โดยวิธีการใช้ Agrobacterium tumefaciens สายพันธุ์ EHA101 ที่มีพลาสมิด pBIH1-IG(SX) ซึ่งมียีนประมวลรหัสบีตา-กลูคูโรนิเดสเป็นยีนรายงานผล ยีนต้านต่อสารปฏิชีวนะไฮโกรมัยซินและยีนต้านต่อกานามัยซินเป็นยีนคัดเลือก เป็นดังนี้ ใช้เชื้อ A. tumefaciens สายพันธุ์ EHA101 ที่มี พลาสมิด pBIH1-IG(SX) ซึ่งเจริญในระยะ late log phase (24 ชั่วโมง) ความเข้มข้นเซลล์ของ A. tumefaciens 9.0 x 106 เซลล์ต่อมิลลิลิตร เติมอะซิโตไซริงโอนความเข้มข้นสุดท้าย 50 ไมโครโมลาร์ในขั้นตอน cocultivation และบ่มเชื้อ A. tumefaciens ร่วมกับ cotyledon explants ของผักบุ้งอายุ 7 วัน เป็นเวลา 2 ชั่วโมง ที่ภาวะเหมาะสมประสิทธิภาพการถ่ายโอนยีนซึ่งตรวจสอบจากการแสดงออกของยีนประมวลรหัสบีตา-กลูคูโรนิเดสใน cotyledon explants หลังขั้นตอนการ cocultivation มีค่าเท่ากับ 75 เปอร์เซ็นต์ ต้นผักบุ้งทรานสฟอร์แมนท์มีการแสดงออกของยีนประมวลรหัสบีตา-กลูคูโรนิเดสที่ใบ ลำต้นและราก เมื่อตรวจสอบด้วยวิธี histochemical GUS assay การตรวจสอบยืนยันการมีอยู่ของยีนประมวลรหัสบีตา-กลูคูโรนิเดส และยีนต้านต่อสารปฏิชีวนะไฮโกรมัยซิน โดยวิธี PCR พบว่ามียีนทั้งสองสอดแทรกในโครโมโซมของผักบุ้งพันธุ์ทรานสฟอร์แมนท์จริง
Other Abstract: Optimal conditions for the construction of transgenic Pakbung (lpomoea aquatica) via Agrobacterium tumefaciens using A. tumefaciens EHA101 harbouring plasmid pBIH1-IG(SX) having β-glucuronidase gene as a reporter gene, hygromycin phosphotransferase gene (hygromycin resistance gene) and neomycin phosphotransferase II gene (kanamycin resistance gene) as selectable marker genes were as followed: late log phase cells (24 hours culture) of A. tumefaciens at 9.0 x 106 cells/ml. cocultivated with 7-days old l. aquatica cotyledon explants in the presence of 50 β-glucuronidase activity. By histochemical GUS assay, expression of β-glucuronidase was detected in leave, shoot and root of transgenic l. aquatica. The existence of β-glucuronidase and hygromycin phosphotransferase genes in the chromosomal DNA of transgenic l. aquatic were confirmed by PCR method.
Description: Thesis (M.Sc.)--Chulalongkorn University, 2002
Degree Name: วิทยาศาสตรมหาบัณฑิต
Degree Level: ปริญญาโท
Degree Discipline: จุลชีววิทยาทางอุตสาหกรรม
URI: http://cuir.car.chula.ac.th/handle/123456789/23913
ISBN: 9741709226
Type: Thesis
Appears in Collections:Sci - Theses

Files in This Item:
File Description SizeFormat 
Kittima_kh_front.pdf2.18 MBAdobe PDFView/Open
Kittima_kh_ch1.pdf5.03 MBAdobe PDFView/Open
Kittima_kh_ch2.pdf1 MBAdobe PDFView/Open
Kittima_kh_ch3.pdf3.16 MBAdobe PDFView/Open
Kittima_kh_ch4.pdf4.16 MBAdobe PDFView/Open
Kittima_kh_ch5.pdf1.92 MBAdobe PDFView/Open
Kittima_kh_back.pdf4.06 MBAdobe PDFView/Open


Items in DSpace are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.