การแยกแบคทีเรียทนร้อนและลักษณะสมบัติบางประการของไลเปสทนร้อนที่ทำให้บริสุทธิ์บางส่วน

Abstract

จากตัวอย่างดิน 8 ตัวอย่าง และตัวอย่างน้ำ 1 ตัวอย่าง ซึ่งเก็บจากแหล่งที่คาดว่าจะมีเชื้อแบคทีเรียทนร้อนที่ผลิตไลเปสได้ นำมาเลี้ยงที่อุณหภูมิ 65 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 2 วัน สามารถคัดแยกแบคทีเรียที่ผลิตไลเปสได้ 20 สายพันธุ์ โดยแบคทีเรียสายพันธุ์ K3 มีแอคติวิตีและแอคติวิตีจำเพาะของไลเปสมากที่สุดคือ 0.084 หน่วยต่อมิลลิกรัมโปรตีน จากการจำแนกทางสรีรวิทยาและชีวเคมีเบื้องต้น ตามวิธีของ Bergey's Manual of Systematic Bacteriology พบว่าเป็นแบคทีเรียสายพันธุ์ Bacillus stearothermophilus งานวิจัยนี้ศึกษาการทำไลเปสจากเชื้อ K3 ให้บริสุทธิ์บางส่วนโดยคอลัมน์ดีอีเออี ไบโอ-เจลเอ พบว่ามีแอคติวิตีของไลเปส 2 ชนิด คือไลเปสที่ไม่เกาะกับตัวกลางคอลัมดีอีเออี ไบโอ-เจล เอ (unbound) และไลเปสที่เกาะกับตัวกลางคอลัมน์ดีอีเออี ไบโอ-เจล เอ (bound) มีความบริสุทธิ์เพิ่มขึ้น 3.56 เท่า และ 2.80 เท่า เหลือแอคติวิตี 53.22 เปอร์เซ็นต์ และ 7.29 เปอร์เซ็นต์ ตามลำดับ จากการวิเคราะห์น้ำหนักโมเลกุลโดยวิธีโซเดียมโดเดซิลซัลเฟต พอลิอะคริลาไมด์เจลอีเลคโทรโฟริซิสของไลเปสที่ไม่เกาะกับตัวกลาง (unbound) พบว่ามีน้ำหนักโมเลกุลประมาณ 22,000 ดาลตัน จากการศึกษาสมบัติของไลเปสที่ทำให้บริสุทธิ์บางส่วนพบว่า ไลเปสที่ไม่เกาะกับตัวกลาง (unbound) และไลเปสที่เกาะกับตัวกลางคอลัมน์ดีอีเออี ไบโอ-เจล เอ (bound) มีอุณหภูมิที่เหมาะสมคือ 60 องศาเซลเซียส และ 70 องศาเซลเซียส ตามลำดับ เอนไซม์ทั้งสองชนิดมีความเป็นกรดด่างที่เหมาะสมคือ 8.0 มีความเสถียรต่ออุณหภูมิสูงถึง 70 องศาเซลเซียส มีความเสถียรต่อความเป็นกรดด่างในช่วง 7.0-7.5 และเสถียรต่อสภาวะการเก็บที่ -20 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 14 วัน