การหาภาวะที่เหมาะสมในการผลิตนิวทรัลโปรติเอสทนร้อนจาก Bacillus cereus และลักษณะสมบัติของเอนไซม์ที่บริสุทธิ์บางส่วน

Abstract

Bacillus cereus เป็นแบคทีเรียที่ผลิตโปรติเอสทนร้อน ที่แยกได้จากดินบริเวณบ่อน้ำร้อนในประเทศไทย แบคทีเรียที่ถูกคัดเลือกชนิดนี้ถูกจำแนกสายพันธุ์ โดยใช้ลักษณะทางชีวเคมีและยืนยันผลด้วยวิธี 16S rRNA gene จากการทดลองพบว่า ภาวะที่ดีที่สุดคือการใช้ Raja's medium ซึ่งมีสูตรอาหารดังนี้ CaCl2.2H2O 0.1 กรัม, K2HPO4 0.06 กรัม MgSO4. 7H2O 0.05 กรัม, NaCl 0.045 กรัม และ Peptone 0.5 กรัม %(w/v) ที่อุณหภูมิ 37 ํC, pH 7.0, ปริมาณเชื้อเริ่มต้นที่เหมาะสมคือ 0.5% (v/v) ซึ่งมีส่วนประกอบในอาหารคือ 0 กรัม %glucose (w/v), 0.5 กรัม %peptone (w/v) ภายใต้การเลี้ยงในขวดเขย่าขนาด 1 ลิตรซึ่งมีอาหารเลี้ยงเชื้อปริมาตร 300 มล. โดยใช้ความเร็วรอบในการเขย่าที่ 200 รอบต่อนาที และภาวะที่ดีที่สุดในการหาแอคติวิตีของโปรติเอส โดยใช้ azocasein คือที่อุณหภูมิ 55 ํC, pH 7.0 ภายหลังการเลี้ยงเชื้อเป็นเวลา 48 ชั่วโมง สามารถผลิตเอนไซม์ซึ่งมีค่าแอคติวิตีสูงที่สุดเท่ากับ 5.69 หน่วยต่อมก. โปรตีน จากการหาน้ำหนักโมเลกุลของเอนไซม์โดยวิธีเซฟาเดกซ์ จี-75 คอลัมน์โครมาโตรกราฟี พบว่ามีน้ำหนักโมเลกุล 34,700 ดาลตัน ส่วนการหาหน่วยย่อยของเอนไซม์ด้วยวิธี Substrate-Containing SDS Zymogram gel พบว่ามีน้ำหนักโมเลกุล 44,700 ดาลตัน แคลเซียมอิออนสามารถเร่งการทำงานของ crude enzyme ได้และสารที่ยับยั้งการทำงานของเอนไซม์คือ EDTA นิวทรัลโปรติเอสที่ผลิตจาก B. cereus สามารถย่อยสับสเตรททั้ง casein หรือ azocasein ได้ดีกว่านิวทรัล โปรติเอสที่ผลิตจาก B.subtilis TISTR 25