การสังเคราะห์ตัวติดตามสำหรับตรวจหาโพลีฟอสเฟตแบคทีเรียในน้ำเสีย

Abstract

งานวิจัยนี้แยกเชื้อแบคทีเรียจากตัวอย่างน้ำเสียที่เก็บจากโรงบำบัดน้ำเสียสี่พระยากรุงเทพมหานคร ด้วยอาหารเลี้ยงเชื้อน้ำเสีย พบว่าได้เชื้อแบคทีเรียทั้งหมด 143 สายพันธุ์ และเมื่อย้อมสีแบคทีเรียด้วยอัลคาไลน์ ลอฟเฟลอร์ส เมทิลีน บลู พบแบคทีเรียที่สามารถสะสมโพลีฟอสเฟตได้ 10 สายพันธุ์ภายใต้ภาวะไร้อากาศและมีการให้อากาศ พบว่ามีเชื้อแบคทีเรียตัวอย่าง 3 สายพันธุ์ คือ CUW-1, CUW-3 และ CUW-8 ที่มีเปอร์เซ็นต์การดูดซับไว้ภายในเซลล์มากกว่า 25 เปอร์เซ็นต และเมื่อจำแนกสกุลของแบคทีเรียตัวอย่างดังกล่าว พบว่า CUW-1 น่าจะเป็น Propionibacterium sp., สายพันธุ์ CUW-3 น่าจะเป็น Corynebacterium sp. และสายพันธุ์ CUW-8 น่าจะเป็น Renibacterium sp. และเมื่อวิเคราะห์กิจกรรมจำเพาะของเอนไซม์โพลีฟอสเฟตไคเนสของเชื้อทั้งสามสายพันธุ์ในสภาวะมีการให้อากาศ เท่ากับ 0.3945, 0.552 และ 0.256 หน่วยต่อมิลลิกรัมโปรตีน ตามลำดับ และจากการออกแบบดีเอ็นเอไพร์เมอร์เพื่อใช้ในการเพิ่มปริมาณยีน ppk ด้วยวิธีพีซีอาร์ในเชื้อตัวย่างทั้งสามชนิดพบว่าไม่สามารถเพิ่มปริมาณได้ แต่สามารถตรวจพบการเพิ่มปริมาณยีนดังกล่าวในเชื้อ E. coli JM109 ซึ่งเป็นตัวควบคุมบวกโดยมีขนาดผลิตผลประมาณ 650 เบสแพร์ และเมื่อติดฉลากผลผลิตดังกล่าวด้วย digoxigenin แล้วใช้เป็นตัวติดตามตำแหน่งของยีน ppk ในเชื้อตัวอย่างนั้น 3 สายพันธุ์พบว่าปรากฏสัญญาณแสดงตำแหน่งของยีน ppk ของเชื้อตัวอย่างเพียง 2 สายพันธุ์คือ CUW-1 และ CUW-3 โดยสัญญาณดังกล่าวมีขนาดประมาณ 3 กิโลเบสแพร์ และเกิดสัญญาณที่ขนาดประมาณ 10 กิโลเบสแพร์ในเชื้อ E.coli JM109 ที่เป็นตัวควบคุมบวก