Please use this identifier to cite or link to this item: http://cuir.car.chula.ac.th/handle/123456789/37418
Title: เมทิเลชันของยีน CCNA1 ในเซลล์สายพันธุ์มะเร็งปากมดลูกที่ถูกทรานสเฟกต์ด้วยยีน E7 ของ Human Papillomavirus ไทป์ 16
Other Titles: Methylation of CCNA1 gene in cervical cancer cell line transfected with E7 gene of Human Papillomavirus type 16
Authors: วัชรพงศ์ ภักดีชายแดน
Advisors: ปฐมวดี ญาณทัศนีย์จิต
Other author: จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย. คณะวิทยาศาสตร์
Advisor's Email: Pattamawadee.Y@Chula.ac.th
Subjects: ปากมดลูก -- มะเร็ง
ยีน
โรคเกิดจากไวรัส
แปปิลโลมาไวรัส
การแสดงออกของยีน
Cervix uteri -- Cancer
Genes
Virus diseases
Gene expression
Papillomaviruses
Issue Date: 2555
Publisher: จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย
Abstract: สาเหตุหลักของการเกิดมะเร็งปากมดลูก คือ การติดเชื้อไวรัส human papillomavirus (HPV) ซึ่งจัดเป็นสาเหตุหลัก ผู้ป่วยจะถูกตรวจพบเชื้อ HPV ไทป์ที่มีความเสี่ยงสูง (HR-HPV) มากกว่าร้อยละ 90% โดยเฉพาะ HPV ไทป์ 16 และ 18 การศึกษาที่ผ่านมาพบความสัมพันธ์ระหว่างการเกิดเมทิเลชันและการยับยั้งการแสดงออกของยีนที่นำไปสู่โรคมะเร็ง พบว่าการเกิดมะเร็งปากมดลูกซึ่งมีการติดเชื้อ HPV มีความสัมพันธ์ต่อการเกิด เมทิเลชัน ของ CCNA1 ซึ่งมีบทบาทเสมือนเป็นยีนต้านมะเร็งในมะเร็งปากมดลูกถึง 93% วัตถุประสงค์ของงานวิจัย เพื่อศึกษาความสัมพันธ์ระหว่างยีน E7 ในไวรัส HPV ไทป์ 16 กับดีเอ็นเอเมทิเลชันบนโพรโมเตอร์ของยีน CCNA1 ในการทดลองผู้วิจัยได้เลี้ยงเซลล์สายพันธุ์มะเร็งปากมดลูก 3 ชนิด คือ HeLa cell ที่มีการติดเชื้อของ HPV ไทป์ 18, SiHa cell ที่มีการติดเชื้อของ HPV ไทป์ 16 และ C33A cell ซึ่งไม่มีการติดเชื้อของไวรัส HPV และเซลล์สายพันธุ์มะเร็งหูคอจมูก 3 ชนิด คือ HN4 , HN12 และ HN17 ซึ่งยังไม่ทราบการติดเชื้อ นำเซลล์ทั้ง 6 ชนิดมาตรวจสอบการติดเชื้อ HPV จากนั้นตรวจสอบเมทิเลชันและการแสดงออกของยีน CCNA1 จากนั้นมุ่งเน้นไปที่ยีน E7 ของ HPV 16 โดยการสร้าง plasmid ที่ใส่ยีน E7 ของ HPV ไทป์ 16 และทรานสเฟกต์ plasmid นี้เข้าไปใน C33A และ HN 12 จากนั้นจึงตรวจสอบ เมทิเลชันและการแสดงออกของยีน CCNA1 อีกครั้งใน C33A และ HN 12 เพื่อเปรียบเทียบระหว่างเซลล์ที่ถูกทรานสเฟกต์ยีน E7 กับเซลล์ที่ไม่ได้ถูกทรานสเฟกต์ ผลการวิจัยพบว่า เซลล์ C33A ที่ถูกทรานสเฟกต์ยีน E7 ของไวรัส HPV ไทป์ 16 มีเมทิเลชันของยีน CCNA1 ที่เพิ่มมากขึ้น และพบการแสดงออกของยีนนี้ลดลงเมื่อเทียบกับเซลล์ที่ไม่ได้ถูกทรานสเฟกต์ ส่วนเซลล์ HN12 ที่ถูกทรานสเฟกต์ยีน E7 ตรวจพบเมทิเลชันของยีน CCNA1 เมื่อเทียบกับเซลล์ที่ไม่ได้ถูกทรานสเฟกต์จะไม่มีเมทิเลชัน และการแสดงออกของยีนก็ลดลงเช่นเดียวกับเซลล์ C33A ทำให้สามารถสรุปได้ว่า ยีน E7 ของไวรัส HPV 16 มีผลต่อการเกิดเมทิเลชันของยีน CCNA1 ในมะเร็งปากมดลูก
Other Abstract: The main cause of cervical cancer are infection of human papillomavirus (HPV) by which high-risk HPV (HR-HPV) can be detected in cervical cancer patients more than 90%, particularly HPV type 16 and 18. Previous studies found the correlation of methylation and expression inhibition of genes leading to cancer and cervical cancer which is infected by HPV is associated with methylation of CCNA1 which has a role as tumor suppressor gene in cervical cancer up to 93%. The aim of this research to study the correlation of E7 gene in HPV type 16 and DNA methylation on CCNA1 promoter. We cultured 3 cervical cancer cell lines : HeLa (HPV type 18 infection), SiHa (HPV type 16 infection) and C33A (no HPV infection) and 3 head and neck cell lines : HN4, HN12 and HN17 which are still unknown of HPV type infection. We detected HPV type infection in these 6 cell lines and methylation and expression of CCNA1. Then we emphasized to study E7 gene of HPV type 16 by constructing the plasmid inserted E7 gene of HPV type 16 and trasfecting it into C33A and HN12. Lastly, we verified the difference of methylation status and expression of CCNA1 in these 2 transfected cell lines and non-transfected cell lines.The results show that C33A which is transfected by E7 gene of HPV type 16 has more methylation on CCNA1 promoter as well as the expression of CCNA1 is decreased when compared to non-tranfected cells. What’s more, HN12 which is transfected by E7 has methylation; yet methylation is not found in non-tranfected HN12. Besides that the decreasing expression of CCNA1 is found. On the whole, we conclude that E7 gene of HPV type 16 has affected to methylation of CCNA1 in cervical cancer.
Description: วิทยานิพนธ์ (วท.ม.) --จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย, 2555
Degree Name: วิทยาศาสตรมหาบัณฑิต
Degree Level: ปริญญาโท
Degree Discipline: พันธุศาสตร์
URI: http://cuir.car.chula.ac.th/handle/123456789/37418
URI: http://doi.org/10.14457/CU.the.2012.1100
metadata.dc.identifier.DOI: 10.14457/CU.the.2012.1100
Type: Thesis
Appears in Collections:Sci - Theses

Files in This Item:
File Description SizeFormat 
watcharapong_pa.pdf4.55 MBAdobe PDFView/Open


Items in DSpace are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.