DSpace  
 

CUIR at Chulalongkorn University >
Faculty and Institute >
Faculty of Medicine - Med >
Med - Theses >

Please use this identifier to cite or link to this item: http://cuir.car.chula.ac.th/handle/123456789/52322

Title: การควบคุมเหนือพันธุกรรมของยีน Nrf2 โดยอนุพันธ์ออกซิเจนที่ว่องไวต่อการลุกลามของมะเร็งตับ
Other Titles: EPIGENETIC REGULATION OF Nrf2 GENE BY REACTIVE OXYGEN SPECIES IN HEPATOCELLULAR CARCINOMA PROGRESSION
Authors: จักรีวงศ์ มาอ้น
Advisor: ชาญชัย บุญหล้า
Advisor's Email: Chanchai.B@Chula.ac.th,cboonla@gmail.com
Issue Date: 2559
Publisher: จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย
Abstract: อนุพันธ์ออกซิเจนที่ว่องไวถูกสร้างมากขึ้นในมะเร็งมะเร็งทุกชนิดรวมทั้งมะเร็งตับ ทำให้เกิดภาวะเครียดจากออกซิเดชั่นในสภาวะแวดล้อมมะเร็ง (tumor microenvironment) ในงานวิจัยนี้มีวัตถุประสงค์เพื่อศึกษาการแสดงออกของ Nuclear factor erythroid 2-related factor 2 (Nrf2) และ 8-hydroxydeoxyguanosine (8-OHdG) ในชิ้นเนื้อมะเร็งจากผู้ป่วยมะเร็งตับและในเซลล์มะเร็งตับเพาะเลี้ยง (HepG2 cells) ศึกษาความสัมพันธ์ทางคลินิกของการแสดงออก Nrf2 และ 8-OHdG ในผู้ป่วยมะเร็งตับ ทดสอบว่าอนุพันธ์ออกซิเจนที่ว่องไวสามารถกระตุ้นการลุกลามของเซลล์มะเร็งตับได้หรือไม่ และศึกษาว่ากลไกการเพิ่มการแสดงออกของ Nrf2 ในเซลล์มะเร็งตับเพาะเลี้ยงหลังจากกระตุ้นด้วยอนุพันธ์ออกซิเจนที่ว่องไวอาศัยกลไกเหนือพันธุกรรม (epigenetics) หรือไม่ ผลการย้อมชิ้นเนื้อทางอิมมูโนวิทยาพบว่า การแสดงออกของ Nrf2 และ 8-OHdG เพิ่มขึ้นในชิ้นเนื้อมะเร็งตับเมื่อเปรียบเทียบกับชื้นเนื้อข้างเคียงที่ไม่เป็นมะเร็งตับ การแสดงออกของ 8-OHdG ที่สูงขึ้นสัมพันธ์กับอัตราการรอดชีวิตที่ต่ำลงของผู้ป่วยมะเร็งตับ ในการศึกษาภาวะเครียดจากออกซิเดชั่นในเซลล์เพาะเลี้ยงของมะเร็งตับโดยใช้ไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์เป็นตัวกระตุ้นการเกิดภาวะเครียดจากออกซิเดชั่น พบว่าในเซลล์ที่ได้รับไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์มีระดับโปรตีนคาร์บอนิลเพิ่มขึ้นแต่ระดับสารต้านอนุมูลอิสระโดยรวมลดลง และผลการย้อมเซลล์ทางอิมมูโนวิทยาพบว่าการแสดงออกของ Nrf2 และ 8-OHdG เพิ่มขึ้นในเซลล์ที่ได้รับไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์เช่นกัน แต่ภาวะเครียดจากออกซิเดชั่นและการแสดงออกของ Nrf2 และ 8-OHdG ที่เพิ่มขึ้นในเซลล์ที่ได้รับไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์สามารถยับยั้งได้ด้วยสารต้านอนุมูลอิสระวิตามินอี (Tocopheryl acetate) และตัวให้หมู่เมทิล S-adenosylmethionine (SAM) ผลการวัดการลุกลามของเซลล์มะเร็งตับพบว่ามีระดับสูงมากขึ้นในเซลล์ที่ได้รับไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ แต่วิตามินอีและ SAM สามารถลดการลุกลามของเซลล์มะเร็งตับได้ ผลการศึกษา Bisulfite sequencing พบว่าไม่มีการเติมหมู่เมทิลที่ CpG dinucleotides ของ Nrf2 promoter ในเซลล์ที่ได้รับไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ ซึ่งให้ผลคล้ายกับเซลล์ควบคุมที่ไม่ได้รับไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ จากการศึกษานี้สรุปได้ว่า Nrf2 และ 8-OHdG มีการแสดงออกมากขึ้นในชิ้นเนื้อมะเร็งตับ แสดงว่ามีการเพิ่มขึ้นของระบบการตอบสนองต่อภาวะเครียดจากออกซิเดชั่นและมีการทำลายดีเอ็นเอจากปฏิกิริยาออกซิเดชั่นเพิ่มขึ้นด้วย การทำลายดีเอ็นเอที่เพิ่มขึ้นนี้สัมพันธ์กับการมีชีวิตรอดที่ลดลงในผู้ป่วยมะเร็งตับ การศึกษาในเซลล์เพาะเลี้ยงพบว่า อนุพันธ์ออกซิเจนที่ว่องไวสามารถกระตุ้นการแสดงออกของ Nrf2 และ 8-OHdG ได้ และเพิ่มศักยภาพการลุลามของเซลล์มะเร็งตับ อย่างไรก็ตามการเพิ่มขึ้นดังกล่าวสามารถยับยั้งได้ด้วยสารต้านอนุมูลอิสระวิตามินอีและ SAM ดังนั้นผลการศึกษาครั้งนี้ชี้แนะว่า Nrf2 น่าจะมีบทบาทในการเพิ่มการลุกลามของมะเร็งตับภายใต้สภาวะเครียดจากออกซิเดชั่น การได้รับสารต้านอนุมูลอิสระน่าจะช่วยชะลอการลุกลามของมะเร็งตับภายใต้สภาวะเครียดจากออกซิเดชั่นได้
Other Abstract: Reactive oxygen species (ROS) are excessively generated in all solid tumors including hepatocellular carcinoma (HCC) creating an oxidative stress microenvironment. In this study, hepatic expression of nuclear factor erythroid 2-related factor 2 (Nrf2) and 8-hydroxydeoxyguanosine (8-OHdG) were investigated in HCC patients. Clinical relevance of these two oxidative stress markers were evaluated. Whether tumor aggressiveness of HCC cells was enhanced by ROS, and if ROS epigenetically up-regulated Nrf2 in HCC cells were investigated. Immunohistochemical staining for Nrf2 and 8-OHdG were performed in hepatic sections obtained from HCC patients. Expression of Nrf2 and 8-OHdG were remarkably increased in HCC tissues compared with the noncancerous hepatic tissues. Elevated expression of 8-OHdG was associated with poor survival in HCC patients. H2O2, an ROS representative, provoked oxidative stress in HepG2 cells, indicated by increased protein carbonyl content and decreased total antioxidant capacity. Nrf2 expression and 8-OHdG formation were markedly increased in the H2O2-treated cells compared with the untreated control. Co-treatment with antioxidants, tocopheryl acetate (TA) and S-adenosylmethionine (SAM), effectively attenuated the Nrf2 and 8-OHdG expression in H2O2-treated cells. HepG2 cells treated with H2O2 had significantly higher migration and invasion capabilities than untreated control cells. These tumor aggressive activities were significantly inhibited by TA and SAM co-treatments. Bisulfite sequencing revealed that CpG dinucleotides in Nrf2 promoter were unmethylated in H2O2-treated cells similar to untreated control. In conclusion, robust histological evidence of increased antioxidative response and oxidative DNA damage in human HCC tissues was demonstrated. Elevated oxidative DNA lesion 8-OHdG was associated with a shorter survival in HCC patients. Experimentally, ROS enhanced NRF2 expression, 8-OHdG formation, and tumor progression in HCC cells. These enhancements were inhibited by antioxidant TA and SAM. The present findings suggest that Nrf2, at least in part, involves in the oxidative stress-induced HCC progression. Antioxidants might be beneficial to decelerate the HCC progression induced by ROS.
Description: วิทยานิพนธ์ (วท.ม.)--จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย, 2559
Degree Name: วิทยาศาสตรมหาบัณฑิต
Degree Level: ปริญญาโท
URI: http://cuir.car.chula.ac.th/handle/123456789/52322
Appears in Collections:Med - Theses

Files in This Item:

File Description SizeFormat
5774012830.pdf8.9 MBAdobe PDFView/Open  (Chula only)
View Statistics

Items in DSpace are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.

 

Valid XHTML 1.0! DSpace Software Copyright © 2002-2010  Duraspace - Feedback