การผลิตและทำไลเปสให้บริสุทธิ์บางส่วนจาก Bacillus subtilis ที่เลี้ยงในน้ำมันพืช

Abstract

ทำการเลี้ยงเชื้อ Bacillus subtilis เพื่อผลิตไลเปสและทดสอบสูตรอาหารที่คาดว่าเหมาะสมสำหรับการผลิตเปส โดยสูตรอาหารประกอบด้วย แหล่งคาร์บอนซึ่งใช้น้ำมันมะกอก 0.075 % ที่ทำให้เป็นวัฏภาคเดียวโดยใช้ เลซิตินเป็นอิมัลซิฟายเออร์ และมี yeast extract หรือ inorganic salf เป็นแหล่งไนโตรเจน โดยมีสภาวะการเลี้ยงเชื้อที่ความเร็วรอบในการเขย่าให้อากาศ 200 รอบต่อนาที , ใช้เชื้อเริ่มต้นที่ความขุ่นเมื่อวัดการดูดกลืนแสงที่ความยาว คลื่น 600 นาโนเมตร เท่ากับ 0.1 pH เริ่มต้นในการเลี้ยงเชื้อเท่ากับ 6-8 , อุณหภูมิ 300 ซ และเวลาเลี้ยงเชื้อ 6 ชั่วโมงผลการทดสอบไลเปสที่ได้ในหลังเลี้ยงเชื้อโดยการวัดปริมาณกรดไขมันที่ถูกย่อ จากชับสเตรทด้วยการไตเตรทกับ 0.025 โมล โปแตสเซียมไฮดรอกไซด์สูตรอาหารดังกล่าวได้ไลเปส 8.86 ยูนิตต่อมิลลิลิตร และค่าแอคติวิตีรวม 2,685 ยูนิต ไลเปสที่ได้เมื่อนำมาตกตะกอนหลังแยกด้วยวิธี aqueous two-phase systems โดยปรับสัดส่วนของ PEG กับแอมโมเนียมซัลเฟต พบสัดส่วนของ aqueous two-phase systems ที่เหมาะสม คือ มีอัตราส่วนของ PEG: แอมโมเนียมซัลเฟต: น้ำเลื้ยงเชื้อ เท่ากับ 35.00 : 6.00:59.00 เมื่อตกตะกอนแล้วนำไปหาแอคติวิตีจากน้ำเลี้ยงเชื้อ 300 มิลลิลิตรได้ไลเปสมีแอคติวิตี 13.2 ยูนิตต่อมิลลิลิตร มีความบริสุทธิ์ 28.31 เท่า และได้ผลผลิต 34.8 เปอร์เซ็นต์ ไลเปสที่ได้เมื่อนำไปหาน้ำหนักโมเลกุลเปรียบเทียบด้วยวิธีเอสดีเอส-โพลีอะไครลาไมด์เจลอิเลคโตรโฟลีซิสจะได้น้ำหนักโมเลกุล 79 กิโลดาลตัน