Please use this identifier to cite or link to this item: http://cuir.car.chula.ac.th/handle/123456789/61899
Title: Purification and characterization of xylanase from endophytic fungus Alternaria alternata isolate PTRa9
Other Titles: การทำให้บริสุทธิ์และลักษณะสมบัติของไซลาเนสจากราเอนโดไฟต์ Alternaria alternata ไอโซเลต PTRa9
Authors: Nichawee Wipusaree
Email: No information provinded
Advisors: Apichart Karnchanatat
Prakitsin Sihanonth
Jittra Piapukiew
Other author: Chulalongkorn University. Faculty of Science
Advisor's Email: Aphichart.K@Chula.ac.th
Prakitsin.S@Chula.ac.th,sprakits@chula.ac.th
jittra.k@chula.ac.th
Subjects: Alternaria alternata
Xylanase
Endophytic fungi
เชื้อราเอนโดไฟต์
Issue Date: 2010
Publisher: Chulalongkorn University
Abstract: Microorganisms were the major sources of xylanase production due to there were important in agriculture and industrial. The aim of this research was to study the xylanase production from endophytic fungi. Totally 54 endophytes isolated from Corton oblongifolius Roxb., Palm and mangrove leaves were tested for xylanase activity. There were only 31 endophytes isolated produce clear zone around colony in selective xylan agar medium which indicated xylanase-producing in primary screening. Endophyte isolate PTRa9 yield the highest xylanase-production in secondary screening. The optimal conditions that PTRa9 produced highest xylanase activity when 2% rice bran and 0.1% (NH₄)₂SO₄ as carbon and grew in the medium supplemented with nitrogen source, respectively for 4 days. Xylanase purification was done by ammonium sulfate precipitation, ion exchange chromatography and gel filtration chromatography which resulted in an apparent increase in specific activity as 161.1 U/mg protein and 60.8 times of purity. Xylanase characterization includes thermal stability, pH stability, metal ions, kinetic analysis and molecular weight were studied and the result showed that at 40°C for 20 min, at pH range 3 to 11 for 60 min had relative xylanase activity of 131.27 and higher than 100 %, respectively. PTRa9 xylanase was strongly inhibited by Hg²⁺, and was moderately inhibited by Mg²⁺, Mn²⁺, Cu²⁺, Zn²⁺, Fe²⁺ and EDTA. For kinetic analysis, it had Km of 2.369 mg/ml and Vmax of 2.142 µl/min/mg protein. Molecular weight of Xylanase of PTRa9 was of 54.8 kDa.
Other Abstract: จุลินทรีย์เป็นแหล่งสร้างไซลาเนสที่สำคัญ และมีความสำคัญทางการเกษตรและอุตสาหกรรม ในงานวิจัยนี้ได้มุ่งเน้นการศึกษาไซลาเนสสร้างโดยราเอนโดไฟต์ ทดสอบราเอนโดไฟต์จำนวน 54 ไอโซเลต ที่แยกราเอนโดไฟต์จากใบพืชเปล้าใหญ่ ปาล์ม และไม้โกงกาง พบว่ามีราเพียง 31 ไอโซเลตที่สร้างบริเวณใสรอบโคโลนีที่เจริญบนอาหารเลี้ยงเชื้อที่มีไซแลนเป็นองค์ประกอบ ซึ่งแสดงความสามารถสร้างไซลาเนสได้ ในการคัดเลือกขั้นปฐมภูมิ และตรวจพบว่าราไอโซเลต PTRa9 มีค่ากิจกรรมของไซลาเนสสูงสุดในการคัดเลือกขั้นทุติยภูมิ สภาวะที่ราเอนโดไฟต์ PTRa9 มีกิจกรรมไซลาเนสสูงสุดเมื่อใช้รำข้าวที่ความเข้มข้น 2 เปอร์เซ็นต์เป็นแหล่งคาร์บอน แอมโมเนียมซัลเฟตที่ความเข้มข้น 0.1 เปอร์เซ็นต์เป็นแหล่งไนโตรเจน บ่มที่ระยะเวลา 4 วัน ทำไซลาเนสให้บริสุทธิ์ประกอบด้วยการตกตะกอนโปรตีนด้วยเกลือแอมโมเนียมซัลเฟต โครมาโทกราฟีแบบแลกเปลี่ยนประจุ และโครมาโทกราฟีแบบแยกตามขนาดโมเลกุล พบว่ามีค่ากิจกรรมแบบจำเพาะเพิ่มสูงขึ้นถึง 161.1 ยูนิต/มิลลิกรัม โปรตีน มีความบริสุทธิ์เพิ่มขึ้น 60.8 เท่า ความเสถียรที่อุณหภูมิ 40 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 20 นาที ที่ช่วงค่าความเป็นกรดด่างตั้งแต่ 3 ถึง 11 เป็นระยะเวลา 60 นาที ให้กิจกรรมไซลาเนสโดยเทียบเคียงมีค่าเท่ากับ 131.27 เปอร์เซ็นต์และมากกว่า 100 เปอร์เซ็นต์ของชุดควบคุมตามลำดับ ปรอทมีฤทธิ์ยับยั้งการทำงานของไซลาเนสได้สูง ขณะที่แมกนีเซียม แมงกานีส คอปเปอร์ สังกะสี เหล็ก และ อีดีทีเอ ยับยั้งการทำงานของไซลาเนสได้ปานกลาง ค่า Km มีค่าเท่ากับ 2.369 มิลลิกรัม/มิลลิลิตร และ Vmax มีค่าเท่ากับ 2.142 ไมโครโมล/นาที/มิลลิกรัมโปรตีน ไซลาเนสบริสุทธิ์ของราเอนโดไฟต์ไอโซเลต PTRa9 มีน้ำหนักโมเลกุลเท่ากับ 54.8 กิโลดาลตัน
Description: Thesis (M.Sc.)--Chulalongkorn University, 2010
Degree Name: Master of Science
Degree Level: Master's Degree
Degree Discipline: Biotechnology
URI: http://cuir.car.chula.ac.th/handle/123456789/61899
URI: http://doi.org/10.14457/CU.the.2010.749
metadata.dc.identifier.DOI: 10.14457/CU.the.2010.749
Type: Thesis
Appears in Collections:Sci - Theses

Files in This Item:
File Description SizeFormat 
5172288823_2010.pdf970.3 kBAdobe PDFView/Open


Items in DSpace are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.