Please use this identifier to cite or link to this item: https://cuir.car.chula.ac.th/handle/123456789/64970
Full metadata record
DC FieldValueLanguage
dc.contributor.advisorRath Pichyangkura-
dc.contributor.authorSitipon Leerawatthanakun-
dc.contributor.otherChulalongkorn University. Faculty of Science-
dc.date.accessioned2020-04-05T07:58:16Z-
dc.date.available2020-04-05T07:58:16Z-
dc.date.issued2017-
dc.identifier.urihttp://cuir.car.chula.ac.th/handle/123456789/64970-
dc.descriptionThesis (M.Sc.)--Chulalongkorn University, 2017-
dc.description.abstractBacterial isolate HM7 was isolated from Dynastes hercules larvae excrement. It was identified as Bacillus sp. by 16S rRNA gene analysis. When the bacteria were cultured for β-mannanase production in medium containing konjac flour it had the highest specific activity of 138 U/mg at 36 h, and when cultured in medium containing coconut meal it had the highest specific of 114 U/mg at 48 h. The 1089 base pairs long of a β-mannanase encoding gene (Man26HM7) was successfully cloned and expressed in Escherichia coli BL21 (DE3), using pET21-b expression system. The enzyme was purified and characterized. The optimal condition MAN26HM7catalysis was 50 o C and pH 6.0. MAN26HM7 showed surfactant-tolerant ability when compared to Bacillus subtilis CAe24 mannanase (MAN26CAe24). The residual activity of MAN26HM7 and MAN26CAe24 was 90% and 60% after incubated with 1.0 % (w/v) SDS at 37 °C for 180 min, and retaining 60 % and 40 % of MAN26HM7 and MAN26CAe24 activity at 2.0% (w/v) SDS at 50 and 60 °C, respectively. Powder detergent at 0.5 % (w/v) decreased β-mannanase activity, retaining more than 55 % and 51 % of MAN26HM7 and MAN26CAe24) activity, respectively, more than 5 % (v/v) liquid detergent, retaining more than 95 % and 90 % of MAN26HM7 and MAN26CAe2424) activity. Amino acid sequence alignment of MAN26HM7 and MAN26CAe24 showed amino acid changes at 7 positions, one of which was found in the interior of the protein, leucine 238. Leucine at this position in MAN26HM7 was replaced with Isoleucine in MAN26CAe24. Sited-directed mutagenesis of amino acid at this position in MAN26CAe24 from I to L improved SDS-tolerant of the enzyme. Surfactant-tolerant β -mannanase can be applied in detergent industry.-
dc.description.abstractalternativeเมื่อวิเคราะห์ยีน 16S rRNA ของแบคทีเรียสายพันธุ์ HM7 ที่แยกได้จากของเสียของตัวอ่อนด้วง แล้ว พบว่าเเป็นแบคทีเรียกลุ่ม Bacillus แมนแนนเนสที่ได้จากการเลี้ยงเชื้อในอาหารเลี้ยงเชื้อที่มีการเติมผงบุกมีแอกติวิตีจำเพาะสูงสุด 138 ยูนิตต่อมิลลิกรัมโปรตีนที่เวลา 36 ชั่วโมง และที่มีการเติมกากมะพร้าวมีแอกติวิตีจำเพาะสูงสุด 114 ยูนิตต่อมิลลิกรัมโปรตีนที่เวลา 48 ชั่วโมง จากนั้นทำการโคลนและแสดงออกยีนแมนแนนเนส (Man26HM7) ที่มีขนาด 1089 คู่เบสใน Escherichia coli BL21 (DE3) โดยใช้ pET21-b และศึกษาลักษณะสมบัติ พบว่ามีภาวะที่เหมาะสมในการเร่งปฏิกิริยาของแมนแนนเนสจากสายพันธุ์ HM7 (MAN26HM7) คือ 50 oC ที่ พีเอช 6.0 จากการเปรียบเทียบความทนทานต่อ SDS ของเอนไซม์ MAN26HM7 และ แมนแนนเนส จาก Bacillus subtilis CAe24 (MAN26CAe24) ต่อ SDS พบว่า เมื่อทำการบ่มเอนไซม์ในสภาวะที่มี SDS ความเข้มข้น 1% (w/v) ที่อุณหภูมิ 37 oC เป็นเวลา 180 นาที MAN26HM7 มีแอกติวิตีเหลือมากกว่า 90% ขณะที่แอกติวิตีของ MAN26CAe24 เหลือมากกว่า 60% และในสภาวะที่มี SDS เท่ากับ 2% (w/v) ที่อุณหภูมิ 50 และ 60 oC MAN26HM7 และ MAN26CAe24 มีแอกติวิตีเหลือ 60% และ 40% ตามลำดับ และเมื่อบ่มแมนแนนเนสในสภาวะที่มีสารซักฟอกแบบผง ที่ความเข้มข้น 0.5% (w/v) ลดแอกติวิตีของเอนไซม์ MAN26HM7 และ MAN26CAe24 เหลือ 55% และ 51% ตามลำดับ ได้มากกว่าสารซักฟอกแบบน้ำที่ความเข้มข้น 5% (w/v) MAN26HM7และ MAN26CAe24 มีแอกติวิตีเหลือ 95% และ 90% ตามลำดับ เมื่อเปรียบเทียบลำดับกรดอะมิโนของ MAN26HM7 และ MAN26CAe24 พบว่ามีกรดอะมิโนที่ต่างกันทั้งหมด 7 ตำแหน่ง โดยมี 1 ตำแหน่งที่อยู่ด้านในของเอนไซม์คือ ลิวซีนที่ตำแหน่ง 238 ใน MAN26HM7 ที่ต่างจากMAN26CAe24  เมื่อทำการกลายพันธุ์เฉพาะจุดของกรดอะมิโนในตำแหน่ง ไอโซลิวซีน 238 ของ MAN26CAe24 โดยเปลี่ยนจาก ไอโซลิวซีน เป็น ลิวซีน พบว่าสามารถเพิ่มความทนทานของเอนไซม์ MAN26CAe24 ต่อ SDS มากขึ้น แมนแนนเนสที่มีสมบัติทนทานต่อ SDS สามารถนำไปประยุกต์ใช้ในอุตสาหกรรมสารซักฟอกได้-
dc.language.isoen-
dc.publisherChulalongkorn University-
dc.relation.urihttp://doi.org/10.58837/CHULA.THE.2017.25-
dc.rightsChulalongkorn University-
dc.subject.classificationBiochemistry-
dc.titleCloning and characterization of bacterial mannanase isolated from dynastes hercules larvae-
dc.title.alternativeการโคลนและลักษณะสมบัติของแมนแนนเนสจากแบคทีเรียที่แยกจากตัวอ่อนด้วงเฮอร์คิวลิส Dynastes hercules-
dc.typeThesis-
dc.degree.nameMaster of Science-
dc.degree.levelMaster's Degree-
dc.degree.disciplineBiochemistry and Molecular Biology-
dc.degree.grantorChulalongkorn University-
dc.email.advisorRath.P@Chula.ac.th-
dc.identifier.DOI10.58837/CHULA.THE.2017.25-
Appears in Collections:Sci - Theses

Files in This Item:
File Description SizeFormat 
5872070923.pdf3.68 MBAdobe PDFView/Open


Items in DSpace are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.