การคาพาซิเตทอสุจิและวิธีการศึกษาโครโมโซมอสุจิของกระบือปลัก (Bubalus bubalis Linn.)

Abstract

จากการศึกษาการคาพาซิเดทอสุจิของกระบือปลัก โดยนำอสุจิแช่แข็งของกระบือปลักมาละลายในน้ำอุ่น อุณหภูมิ 37℃ และปั่นแยกในสารละลายเปอร์คอล (30% และ 40% เปอร์คอลในน้ำยาเพาะเลี้ยง BWW อสุจิที่ได้นำมาละลายในน้ำยาเพาะเลี้ยง BWW 5 มล. (0.5 mM Hypotaurine, 10 mM Cafeine, 0.6% BSA, pH 7.4) และปั่นแยกอีกครั้งที่ 500 g เป็นเวลา 10 นาที นำอสุจิมาปรับความเข้มข้นด้วย BWW และคาพาซิเดทในหลอดแก้วด้วยเฮปารินความเข้มข้น 10, 25, 50 และ 100 µg/ml ในเวลา 15, 30, 45 และ 60 นาที 5% CO₂ ที่อุณหภูมิ 38℃ ตรวจสอบ อสุจิที่ผ่านการคาพาซิเดทและอะโครโซมรี แอ็คชั่น โดยการให้อสุจิปฏิสนธิกับไข่แฮมสเตอร์ที่ไม่มีโซนาเพลลูซิดา จำนวน 6,949 ใบ ผสมอสุจิกับไข่เป็น เวลา 2 ชั่วโมง ใน 5% CO₂ ที่อุณหภูมิ 38℃ และเลี้ยงไข่ไว้ในน้ำยา Ham’s F-10 (10% FCS) เป็นเวลา 8 ชั่วโมง ในการตรวจสอบอัตราการปฏิสนธิ ซึ่งดูจากโปรนิวเคลียส พบว่า ความเข้มข้นและเวลาที่เหมาะสมในการคาพาซิเดทอสุจิ เมื่อเฮปารินความเข้มข้น 10 ถึง 25 µg/ml ในเวลา 15-45 นาที (69.2- 73.3%) จากการทดสอบใช้รูปแบบการหยดน้ำยาเพาะเลี้ยงแบบต่าง ๆ จำนวน 6 แบบ พบว่า หยดน้ำยามี อิทธิพลต่ออัตราการปฏิสนธิ หยดน้ำยาที่มีปริมาตร µg ต่อไข่ 5 ใบ จำนวน 6 หยดต่อจานเพาะเลี้ยง จัดวางตามแนวรัศมี มีศักยภาพในการเกิดการปฏิสนธิดีที่สุด ส่วนการศึกษาโครโมโซมอสุจิของกระบือปลัก ศึกษาจากไข่แฮมสเตอร์จำนวน 3,722 ใบ เมื่อเลี้ยงไข่ ครบ 8 ชั่วโมง ที่อุณหภูมิ 38℃ ใน 5% CO₂ ใส่ podophyllotoxin และ vinblastine อย่างละ 0.06 µg/ml และเลี้ยงต่ออีก 12 ชั่วโมง เมื่อครบแล้วนำไข่มาใส่ hypotonic solution (1 % trisodium citrate) เป็นเวลา 3-6 นาที ที่อุณหภูมิห้อง ใน fixative ที่เย็น (ethanol : glacial acetic acid; 3:1) บนสไลด์ และย้อมสีโครโมโซมด้วย 20% Giemsa นาน 10 นาที ตรวจสอบโครโมโซม พบว่า มีเพียง 2 โอโอไซด์ (0.05%) ที่สามารถเห็นโครโมโซมของอสุจิกระบือปลักไม่สามารถตรวจสอบโครโมโซมได้ละเอียดเพาะโครโม โซมไม่กระจาย การศึกษานี้เป็นการศึกษาเบื้องต้น จำเป็นต้องมีการศึกษาเพิ่มเติมอีก เพื่อที่จะนำมาใช้ในการปฏิสนธิ ในหลอดแก้วของกระบือจริง ๆ ผลการศึกษานี้แสดงให้เห็นว่า อสุจิกระบือปลักสามารถเกิดการคาพาซิเดทได้ โดยใช้เฮปารินและสามารถเจาะผ่านไข่แฮมสเตอร์ที่ไม่มีโซนาเพลลูซิดาได้