1. CUIR at Chulalongkorn University
  2. Faculty and Institute
  3. Graduate School - Grad
  4. Grad - Theses
Please use this identifier to cite or link to this item: https://cuir.car.chula.ac.th/handle/123456789/10176
Full metadata record
DC FieldValueLanguage
dc.contributor.advisorเปี่ยมสุข พงษ์สวัสดิ์-
dc.contributor.advisorทิพาพร ลิมปเสนีย์-
dc.contributor.advisorสมพร กมลศิริพิชัยพร-
dc.contributor.authorพรชัย แซ่กิม-
dc.contributor.otherจุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย. บัณฑิตวิทยาลัย-
dc.date.accessioned2009-08-15T08:31:40Z-
dc.date.available2009-08-15T08:31:40Z-
dc.date.issued2539-
dc.identifier.isbn9746349457-
dc.identifier.urihttp://cuir.car.chula.ac.th/handle/123456789/10176-
dc.descriptionวิทยานิพนธ์ (วท.ม.)--จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย, 2539en
dc.description.abstractศึกษาการทำแอนติบอดีต่อเอนไซม์ไซโคลเดกซ์ทรินไกลโคซิลทรานสเฟอเรสจากซีรั่มกระต่ายให้บริสุทธิ์ โดยใช้วิธีการตกตะกอนด้วยแอมโมเนียมซัลเฟตที่ความเข้มข้นอิ่มตัว 45% และทำโครมาโทกราฟีแบบแลกเปลี่ยนไอออนด้วย DEAE-cellulose พบว่าที่ pH 6.5 แอนติบอดีต่อเอนไซม์ CGTase ไม่ยึดติดกับ DEAE-cellulose resin แอนติบอดีที่เตรียมได้มีความบริสุทธิ์จากการตรวจสอบโดยโพลีอะคริลาไมด์เจลอิเลคโทรโฟรีซิสแบบเอสดีเอส และมีความจำเพาะต่อเอนไซม์ CGTase โดยมีค่าไดเตอร์เท่ากับ 1:2 8 จากการวิเคราะห์ด้วยวิธี Ouchterlony immunodiffusion ได้ทดลองตรึงแอนติบอดีต่อเอนไซม์ CGTase เข้ากับตัวค้ำ CNBr-activated Sepharose 4 B เพื่อเตรียมแอนติบอดีคอลัมน์เพื่อใช้แยกเอนไซม์ CGTase ให้บริสุทธิ์ พบว่าตรึงแอนติบอดีเข้ากับตัวค้ำได้ 98% คิดเป็นปริมาณแอนติบอดี 4.9 มิลลิกรัมต่อตัวค้ำ 1 มิลลิลิตร สภาวะที่เหมาะสมในการแยกเอนไซม์ CGTase ให้ออกจากแอนติบอดีคอลัมน์คือ การใช้สารละลายแอมโมเนียมไฮดรอกไซด์ 50 mM, pH 10.5 ที่มีโซเดียมไธโอไซยาเนต 3.5 Mเป็นสารชะ ด้วยอัตราการชะ 0.1 มิลลิลิตรต่อนาทีที่อุณหภูมิห้อง เอนไซม์ CGTase ที่เตรียมได้มีความบริสุทธิ์เพิ่มขึ้น 155 เท่า และ enzyme yield 45% เมื่อทำการแยกเอนไซม์ CGTase โดยโพลีอะคริลาไมด์เจลอิเลคโทรโฟรีซิสแบบไม่เสียสภาพ พบแถบโปรตีน 2 แถบ แต่จากการทำโพลีอะคริลาไมด์เจลอิเลคโทรโฟรรีซิสแบบเอสดีเอสจะเห็นแถบโปรตีนเพียงแถบเดียวและมีน้ำหนักโมเลกุลประมาณ 72,000 ดาลตันen
dc.description.abstractalternativeA polyclonal antibody prepared cyclodextrin glycosyltransferase (CGTase) was purified from rabbit antiserum by ammonium sulfate precipitation with a 45% saturation and DEAE-cellulose ion exchange chromatography. Fractions were tested for the presence and purity of IgG by SDS-polyacrylamide gel electrophoresis. The result demonstrated that antibody against CGTase of high purity was obtained by the described purification method and the antibody titer was determined to be 1:2 8 by ouchterlony immunodiffusion. The purified antibody was linked to CNBr-activated Sepharose 4 B and used for immunoaffinity purification of CGTase. The bound enzyme was eluted with 3.5 M sodium thiocyanate in 50 mM ammonium hydroxide, pH 10.5, at a flow rate 0.1 millilitre/minute at room temperature. The specific activity of the purfied CGTase was increased 155 folds and about 45% of the total activity was recovered. The prepared enzyme was separated into two bands after non denaturing-polycrylamide gel electrophoresis, but showed only a single band in SDS-polyacrylamide gel electrophoresis. The molecular weight of the protein band was estimated to be 72,000 dalton.en
dc.format.extent806839 bytes-
dc.format.extent840041 bytes-
dc.format.extent857818 bytes-
dc.format.extent1172344 bytes-
dc.format.extent852140 bytes-
dc.format.extent850125 bytes-
dc.format.mimetypeapplication/pdf-
dc.format.mimetypeapplication/pdf-
dc.format.mimetypeapplication/pdf-
dc.format.mimetypeapplication/pdf-
dc.format.mimetypeapplication/pdf-
dc.format.mimetypeapplication/pdf-
dc.language.isothes
dc.publisherจุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัยen
dc.rightsจุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัยen
dc.titleการทำเอนไซม์ไซโคลเดกซ์ทรินไกลโคซิลทรานสเฟอเรสให้บริสุทธิ์ โดยวิธีโครมาโทกราฟีแบบสัมพรรคภาพอิมมูโนen
dc.title.alternativePurification of cyclodextrin glycosyltransferase by immunoaffinity chromatographyen
dc.typeThesises
dc.degree.nameวิทยาศาสตรมหาบัณฑิตes
dc.degree.levelปริญญาโทes
dc.degree.disciplineเทคโนโลยีทางชีวภาพes
dc.degree.grantorจุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัยen
dc.email.advisorPiamsook.P@Chula.ac.th-
dc.email.advisorTipaporn.L@Chula.ac.th-
dc.email.advisorSomporn.K@Chula.ac.th-
Appears in Collections:Grad - Theses

Files in This Item:
File Description SizeFormat 
Pornchai_Ki_front.pdf787.93 kBAdobe PDFView/Open
Pornchai_Ki_ch1.pdf820.35 kBAdobe PDFView/Open
Pornchai_Ki_ch2.pdf837.71 kBAdobe PDFView/Open
Pornchai_Ki_ch3.pdf1.14 MBAdobe PDFView/Open
Pornchai_Ki_ch4.pdf832.17 kBAdobe PDFView/Open
Pornchai_Ki_back.pdf830.2 kBAdobe PDFView/Open
Show simple item record


Items in DSpace are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.