Please use this identifier to cite or link to this item:
https://cuir.car.chula.ac.th/handle/123456789/10427
| Title: | การแสดงออกของยีนบีตา-ไซโลสิเดสของ Streptomyces sp. CH7 ใน Escherichia coli และลักษณะสมบัติของเอนไซม์ |
| Other Titles: | Expression of Beta-xylosidase gene of Streptomyces sp. CH7 in Escherichia coli and characterization of the enzyme |
| Authors: | โตมร ทองน้ำวน |
| Advisors: | ไพเราะ ปิ่นพานิชการ |
| Other author: | จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย. คณะวิทยาศาสตร์ |
| Advisor's Email: | ppairoh@chula.ac.th |
| Subjects: | บีตา-ไซโลสิเดส สเตรปโตมัยซิส ไซลีน การแสดงออกของยีน |
| Issue Date: | 2545 |
| Publisher: | จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย |
| Abstract: | ยีนบีตา-ไซโลสิเดสของ Streptomyces sp. CH7 ในรีคอมบิแนนท์พลาสมิด pCH7-1 สามารถแสดงออกได้ใน E. coli สายพันธุ์ DH5[alpha] ที่ไม่ต้องการการชักนำใกล้เคียงกับสายพันธุ์ JM109 ที่ชักนำด้วย 0.2 มิลลิโมลาร์ IPTG และยังพบว่าไซแลนเป็นแหล่งคาร์บอนที่มีผลเพิ่มประสิทธิภาพการแสดงออกของยีน ขณะที่ไซโลสและกลูโคสยับยั้ง ส่วนระยะเวลาที่เหมาะสมในการเลี้ยงเชื้อเพื่อให้แอคติวิตีจำเพาะของเอนไซม์สูงสุดคือ 15 ชั่วโมง เมื่อนำเอนไซม์ที่ได้จากการแสดงออกของยีนนี้มาทำให้บริสุทธิ์โดยวิธีคอลัมน์โครมาโทกราฟีบน DEAE-Biogel A และ Sephadex G-200 พบว่ามีรูปแบบการทำให้บริสุทธิ์คล้ายคลึงกับเอนไซม์ที่ได้จากสายพันธุ์เดิม นอกจากนี้ยังพบว่าเอนไซม์มีอุณหภูมิและความเป็นกรดด่างที่เหมาะสมในการทำงาน และความเสถียรต่ออุณหภูมิและความเป็นกรดด่างเช่นเดียวกับบีตา-ไซโลสิเดสจากสายพันธุ์เดิม เอนไซม์นี้มีน้ำหนักโมเลกุลประมาณ 178,000 ดาลตัน เมื่อวิเคราะห์โดลเจลฟิลเตรชันและประกอบด้วย 2 หน่วยย่อยที่มีน้ำหนักเท่ากันคือประมาณ 75,000 ดาลตัน จากการหาลำดับนิวคลีโอไทด์ของชิ้นดีเอ็นเอที่โคลนได้ในรีคอมบิแนนท์พลาสมิด pCH7-1 พบกรอบอ่านรหัสเปิดสมบูรณ์ 1 กรอบ ที่ลำดับนิวคลีโอไทด์ 552 ถึง 2927 และแปลเป็นกรดอะมิโนได้ 792 กรดอะมิโน ซึ่งคำนวณเป็นน้ำหนักโมเลกุลได้ 83,386 ดาลตัน |
| Other Abstract: | beta]-Xylosidase gene of Streptomyces sp. CH7 in the recombinant plasmid pCH7-1 has comparable expression ability either in E. coli strains DH5[alpha] without induction or JM109 induced with 0.2 M IPTG. Furthermore, its expression ability was increased by xylan but repressed by glucose and xylose when used as a carbon source for cultivation. The optimal cultivation time giving maximum enzyme specific activity was 15 h. Purification of [beta]-xylosidase from the recombinant E. coli by column chromatography on DEAE-Biogel A and Sephadex G-200 gave similar purification patterns to that of the enzyme from the wild type. The purified enzyme had pH and temperature optimum including its stability to pH and temperature properties similar to that of the wild type. It had molecular weight of 178,000 Da estimated by gel filtration and consisted of 2 identical subunits with molecular weight of 75,000 Da. From the nucleotide sequence analysis of the DNA insert in the recombinant plasmid pCH7-1, it showed one complete open reading frame from nucleotide numbers 552 to 2927 encoding 792 amino acids with calculated molecular weight of 83,386 Da. |
| Description: | วิทยานิพนธ์ (วท.ม.)--จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย, 2545 |
| Degree Name: | วิทยาศาสตรมหาบัณฑิต |
| Degree Level: | ปริญญาโท |
| Degree Discipline: | จุลชีววิทยาทางอุตสาหกรรม |
| URI: | http://cuir.car.chula.ac.th/handle/123456789/10427 |
| ISBN: | 9741711727 |
| Type: | Thesis |
| Appears in Collections: | Sci - Theses |
Files in This Item:
| File | Description | Size | Format | |
|---|---|---|---|---|
| tomorn.pdf | 832.25 kB | Adobe PDF | View/Open |
Items in DSpace are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.