การผลิตและลักษณะสมบัติของโมโนโคลนอลแอนติบอดีต่อแร็กโทพามีน

พรรัตน์ คงคาวิทูร

Please use this identifier to cite or link to this item: https://cuir.car.chula.ac.th/handle/123456789/15535

Full metadata record

DC Field	Value	Language
dc.contributor.advisor	กิตตินันท์ โกมลภิส	-
dc.contributor.advisor	นันทิกา คงเจริญพร	-
dc.contributor.author	พรรัตน์ คงคาวิทูร	-
dc.contributor.other	จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย. คณะวิทยาศาสตร์	-
dc.date.accessioned	2011-07-20T09:42:17Z	-
dc.date.available	2011-07-20T09:42:17Z	-
dc.date.issued	2551	-
dc.identifier.uri	http://cuir.car.chula.ac.th/handle/123456789/15535	-
dc.description	วิทยานิพนธ์ (วท.ม.)--จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย, 2551	en
dc.description.abstract	แร็กโทพามีนเป็นสารเคมีที่อยู่ในกลุ่มเบต้าอะโกนิสต์และถูกยอมรับเป็นสารผสมอาหารสำหรับสุกรและโคกระบือโดยสำนักงานคณะกรรมการอาหารและยาสหรัฐอเมริกา เพื่อกระตุ้นการเติบโตของสัตว์เลี้ยงเพื่อใช้เนื้อในการบริโภค เนื่องจากสารนี้มีผลทำให้ลดการสังเคราะห์ไขมันและเพิ่มการสังเคราะห์โปรตีน อย่างไรก็ตาม มีรายงานการวิจัยหลายฉบับได้กล่าวถึงการตกค้างของสารเบต้าอะโกนิสต์ในผลิตภัณฑ์สัตว์ซึ่งส่งผลเสียต่อมนุษย์ได้ ดังนั้นการใช้แร็กโทพามีนจึงถูกห้ามใช้ในสหภาพยุโรปและเอเชีย งานวิจัยนี้จึงมุ่งในการผลิตและศึกษาลักษณะสมบัติของโมโนโคลนอลแอนติบอดีต่อแร็กโทพามีนเพื่อนำไปใช้พัฒนาชุดตรวจด้วยวิธี ELISA โดยทำการเชื่อมแร็กโทพามีนกับโปรตีนอัลบูมินจากซีรัมของโคสำหรับใช้เป็นแอนติเจนที่ใช้กระตุ้นภูมิคุ้มกันของหนูทดลองสายพันธุ์ BALB/c จำนวน 3 ตัว ซีรัมจากหนูทั้งสามตัวให้ค่าระดับแอนติบอดีสูง ซึ่งอยู่ระหว่าง 1:64000 ถึง 1:512000 ในการผลิตโมโนโคลนอลแอนติบอดีต่อแร็กโทพามีน ทำการหลอมรวมเซลล์ม้ามของหนูทดลองกับเซลล์ไมอีโลมาได้ผลผลิตเป็นเซลล์ไฮบริโดมาที่ผลิตโมโนโคลนอลแอนติบอดีต่อแร็กโทพามีนจำนวน 5 โคลนคือ 10A4, 4B12, 10G3, 2H3 และ 3A6 จากการศึกษาลักษณะสมบัติของโมโนโคลนอลแอนติบอดีพบว่า มีไอโซไทป์เป็น IgG1 มีความไวซึ่งคำนวณอยู่ในรูปค่าความเข้มข้นของสารที่น้อยที่สุดที่สามารถตรวจวัดได้ มีค่าเท่ากับ 0.44, 15.41, 19.85, 29.25 และ 92.19 นาโนกรัมต่อมิลลิลิตร (ppb) ตามลำดับ นอกจากนี้โมโนโคลนอลแอนติบอดีไม่เกิดปฏิกิริยาข้ามกลุ่มกับสารที่นำมาทดสอบ จากทั้ง 5 โคลนที่ได้โมโนโคลนอลแอนติบอดี 10A4 ให้ค่าความไวที่ดีที่สุด เมื่อหาค่า IC50 และค่าความเข้มข้นของสารที่น้อยที่สุดที่สามารถตรวจวัดได้ของโมโนโคลนอลแอนติบอดีหลังทำให้บริสุทธิ์จากโคลน 10A4 มีค่าเท่ากับ 1.85 และ 0.29 นาโนกรัมต่อมิลลิลิตร ตามลำดับ ดังนั้นโมโนโคลนอลแอนติบอดีที่ได้จากโคลน 10A4 มีศักยภาพเพียงพอที่จะนำไปพัฒนาเป็นชุดตรวจแบบจำเพาะสำหรับตรวจสารแร็กโทพามีนได้	en
dc.description.abstractalternative	Ractopamine is a chemical substance in beta-agonist group and has been approved as a feed additive for swine and cattle by the U.S. FDA to promote growth of animals for meat production due to its effects in reducing fat deposition and enhancing protein synthesis. However, many research reported that beta-agonist residues in the animal products cause the adverse effects on human. Thus, the use of ractopamine has not been approved in the European Union (EU) and Asia. This research concentrated on the production and characterization of monoclonal antibodies against ractopamine for the development of ELISA test kit. Ractopamine was conjugated to bovine serum albumin for using as an antigen to immunize three BALB/c mice. Antisera from all mice gave high antiserum titers ranged from 1:64000 to 1:512000. To produce monoclonal antibodies against ractopamine, fusions of spleenocytes and myeloma cells were performed yielding five monoclones, 10A4, 2H3, 4B12, 3A6 and 10G3. Characterization of monoclonal antibodies showed that isotype of these clones was identified as IgG1. Their sensitivities calculated as limit of detection were 0.44, 15.41, 19.85, 29.25 and 92.19 ng/ml (ppb), respectively. In addition, these clones showed no cross-reactivity to all tested chemicals. Among the five clones obtained, monoclonal antibody 10A4 was the most sensitive clone. The IC50 value and limit of detection of the purified monoclonal antibody 10A4 were 1.85 and 0.29 ng/ml, respectively. Consequently, the obtained monoclonal antibody 10A4 could be used to develop a specific test for ractopamine detection.	en
dc.format.extent	1457465 bytes	-
dc.format.mimetype	application/pdf	-
dc.language.iso	th	es
dc.publisher	จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย	en
dc.relation.uri	http://doi.org/10.14457/CU.the.2008.710	-
dc.rights	จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย	en
dc.subject	โมโนโคลนอลแอนติบอดีย์	en
dc.subject	แร็กโทพามีน	en
dc.title	การผลิตและลักษณะสมบัติของโมโนโคลนอลแอนติบอดีต่อแร็กโทพามีน	en
dc.title.alternative	Production and characterization of monoclonal antibodies against ractopamine	en
dc.type	Thesis	es
dc.degree.name	วิทยาศาสตรมหาบัณฑิต	es
dc.degree.level	ปริญญาโท	es
dc.degree.discipline	เทคโนโลยีชีวภาพ	es
dc.degree.grantor	จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย	en
dc.email.advisor	kittinan.k@chula.ac.th	-
dc.email.advisor	ไม่มีข้อมูล	-
dc.identifier.DOI	10.14457/CU.the.2008.710	-
Appears in Collections:	Sci - Theses

Files in This Item:

File	Description	Size	Format
Pornrat_Ko.pdf		1.42 MB	Adobe PDF	View/Open

Show simple item record