Please use this identifier to cite or link to this item:
https://cuir.car.chula.ac.th/handle/123456789/31436
| Title: | การผลิตเอนไซม์เรนนินจาก Rhizopus microsporus S1 |
| Other Titles: | Production of rennin enzyme from Rhizopus microsporus S1 |
| Authors: | สุทธินี มีชอบธรรม |
| Advisors: | สุมาลี พิชญางกูร |
| Other author: | จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย. บัณฑิตวิทยาลัย |
| Advisor's Email: | Sumalee.Pi@Chula.ac.th |
| Subjects: | เรนนิน -- การผลิต อาหารเลี้ยงเชื้อ เชื้อรา เอนไซม์ Rennin -- Production Culture media (Biology) Fungi Enzymes |
| Issue Date: | 2538 |
| Publisher: | จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย |
| Abstract: | การคัดแยกเชื้อรา 51 สายพันธุ์ จากลูกแป้งสุรา ลูกแป้งกระแช่และลูกแป้งข้าวหมากจำนวน 20 ตัวอย่าง พบว่ามีเพียง 9 สายพันธุ์ที่มีแอคติวิตีของเรนนินและได้จำแนกชนิดของเชื้อ พบว่า Rhizopus microsporus S1 เป็นสายพันธุ์ที่มีแอคติวิตีของเรนนินสูงสุด เมื่อใช้สปอร์อายุ 2 วัน จำนวน 10 7 สปอร์/มล. เลี้ยงในอาหารเหลวที่มีรำข้าวเข้มข้น 3% และค่าความเป็นกรดด่างเริ่มต้นที่ 7.3 ในภาวะที่เหมาะสมของในการเลี้ยงเชื้อเพื่อผลิตเอนไซม์เรนนินโดยบ่มบนเครื่องเขย่าที่ความเร็ว 200 รอบต่อนาที อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 4 วัน พบว่ารานี้สามารถผลิตเอนไซม์เรนนินได้ 10 หน่วยต่อ มก.โปรตีน เอนไซม์เรนนินจาก R.microsporus S1 ได้ทำให้บริสุทธิ์ โดยการตกตะกอนลำดับส่วนด้วยแอมโมเนียมซัลเฟตที่ความเข้มข้น 30-75% แล้วแยกด้วยการผ่านคอลัมน์ดีเอวี-โทโยเพิร์ล 650 เอ็ม และคอลัมน์เจลฟิลเตรชั่น เซฟาเด็กซ์ จี-75 พบว่าเอนไซม์นี้มีความบริสุทธิ์ขึ้น 23.86 เท่าและได้ปริมาณเอนไซม์ 10.95% จากเอนไซม์เริ่มต้น การศึกษาสมบัติของเอนไซม์ พบว่าประกอบด้วย 2 โมเลกุลที่มีน้ำหนักโมเลกุลประมาณ 18,000 และ 19,000 ตามลำดับ ภาวะที่เหมาะสมต่อการทำงานของเอนไซม์โปรติเอสคืออุณหภูมิ 35 องศาเซลเซียส ที่ความเป็นกรดด่างเท่ากับ 7.0 ส่วนภาวะที่เหมาะสมต่อการทำงานของเอนไซม์เรนนินคืออุณหภูมิ 55 องศาเซลเซียส ความเป็นกรดด่างเท่ากับ 5.8 โดยใช้นมพร่องไขมันเข้มข้น 10% ในสารละลายแคลเซียมคลอไรด์ 25 มิลลิโมลาร์ สับสเตรทและเอนไซม์นี้มีความเสถียรที่ความเป็นกรดด่าง 2.5-7.5 อุณหภูมิไม่สูงกว่า40 องศาเซลเซียส |
| Other Abstract: | The isolated of 51 fungi strains from 20 samples of lookpangs (mold-bran), 9 strains were found to produce rennin activity. The best activity fungus was identified as Rhizopus microsporus S1, then this fungus was cultured for production of rennin, when using about 10 2 days spores/ml inoculated in medium that contained 3% rice bran at pH 7.3. The optimal cultivation conditions for enzyme rennin production were shaking at 200 rpm and 30℃. Under these conditions, 10 units/mg protein of rennin activity was obtained when cultivated for 4 days. The results of the extraction and purification of rennin enzyme from R.microsporus S1 showed that the fractional precipitation with 30-75% saturation of ammonium sulfate followed by column chromatography on DEAE-Toyopearl 650 M and Sephadex G-75 gel filtration found 23.86 fold increase in purity and 10.95% recovery from crude enzyme. The purified enzyme was found to consist of 2 moleculars having molecular weight of 18,000 and 19,000 daltons respectively. The optimal conditions for the protease enzyme activity were 35℃ at pH 7.0, while optimal conditions for the rennin enzyme activity were 55℃ and pH 5.8 using 10% skim milk in CaCl2 25 mM as substrate. The enzyme was found to be stable in the pH range of 2.5-7.5 and temperature not oven 40℃. |
| Description: | วิทยานิพนธ์ (วท.ม.)--จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย, 2538 |
| Degree Name: | วิทยาศาสตรมหาบัณฑิต |
| Degree Level: | ปริญญาโท |
| Degree Discipline: | จุลชีววิทยา |
| URI: | http://cuir.car.chula.ac.th/handle/123456789/31436 |
| ISBN: | 9746321366 |
| Type: | Thesis |
| Appears in Collections: | Grad - Theses |
Files in This Item:
| File | Description | Size | Format | |
|---|---|---|---|---|
| suttinee_me.pdf | 6.67 MB | Adobe PDF | View/Open |
Items in DSpace are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.