Please use this identifier to cite or link to this item:
https://cuir.car.chula.ac.th/handle/123456789/38309
| Title: | การพัฒนาชุดตรวจสอบสารเอนโรฟลอกซาซินโดยเทคนิคเอนไซม์ลิงค์อิมมูโนซอร์เบนต์แอสเสย์ |
| Other Titles: | Development of enrofloxacin test kit using enzyme-linked immunosorbent assay technique |
| Authors: | ปิติกานต์ วงศ์พานิช |
| Advisors: | กิตตินันท์ โกมลภิส ธนาภัทร ปาลกะ |
| Other author: | จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย. คณะวิทยาศาสตร์ |
| Advisor's Email: | kittinan.k@chula.ac.th Tanapat.P@Chula.ac.th |
| Subjects: | ปฏิชีวนะทางสัตวแพทยศาสตร์ อาหาร -- การเจือปนและการตรวจสอบ เอนโรฟลอกซาซิน Antibiotics in veterinary medicine Food adulteration and inspection Enrofloxacin |
| Issue Date: | 2550 |
| Publisher: | จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย |
| Abstract: | เอนโรฟลอกซาซินเป็นสารปฏิชีวนะในกลุ่มฟลูออโรควิโนโลนที่ได้จากการสังเคราะห์ด้วยวิธีทางเคมี นิยมนำมาใช้ในการควบคุม และรักษาโรคที่เกิดจากแบคทีเรียแกรมบวก และแกรมลบในการทำปศุสัตว์ ทำให้เกิดการตกค้างในผลิตภัณฑ์จากสัตว์ ส่งผลกระทบโดยตรงต่อผู้บริโภค และสามารถเข้าสู่ห่วงโซ่อาหาร ก่อให้เกิดการกระตุ้นการกลายพันธุ์ และการดื้อยาของแบคทีเรีย จึงจำเป็นต้องมีการตรวจหาเอนโรฟลอกซาซินที่ตกค้าง ในงานวิจัยนี้ได้ทำการพัฒนาชุดตรวจสอบเอนโรฟลอกซาซินต้นแบบด้วยเทคนิค Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) จากการเตรียมชุดตรวจสอบทั้งหมด 4 แบบ พบว่าชุดตรวจสอบแบบ Direct competitive ELISA (Ag captured) เป็นชุดตรวจสอบ ที่มีความเหมาะสมที่สุดในการนำมาเตรียมเป็นชุดตรวจสอบต้นแบบ โดยความเข้มข้นของสารต่ำสุด ที่สามารถตรวจวัดได้ (limit of detection, LOD) เท่ากับ 0.5 ppbโดยสามารถตรวจสารได้ในช่วง 0.5-25 ppb ชุดตรวจสอบต้นแบบที่ได้มีความจำเพาะสูง โดยทำปฏิกิริยาข้ามกับสารปฏิชีวนะอื่นๆทั้งในและนอกกลุ่มฟลูออโรควิโนโลนน้อยกว่า 0.01% เมื่อนำชุดตรวจสอบต้นแบบไปทดสอบกับตัวอย่างต่างๆ คือ เนื้อไก่ น้ำนมโค และปัสสาวะโค พบว่า %recovery ที่ได้อยู่ในช่วง 82-111%, 80-125% และ 80-124% ตามลำดับ และจากการตรวจวัดปริมาณสารเปรียบเทียบโดยการใช้ชุดตรวจสอบ ELISA ต้นแบบที่พัฒนาขึ้นเอง ชุดตรวจสอบ ELISA ที่มีจำหน่าย (บริษัท EURO-DIAGNOSTICA) และ HPLC พบว่าให้ผลใกล้เคียงกัน นอกจากนี้จากการทดสอบการแปรปรวนของการวัดของชุดตรวจสอบต้นแบบทั้งแบบ intra-variation และ inter-variation assay พบว่ามีค่าอยู่ในช่วง 2.9-7.4% และ 2.7-15.7% ตามลำดับ แสดงว่าชุดตรวจสอบต้นแบบที่ได้สามารถนำไปใช้ในการวิเคราะห์หา เอนโรฟลอกซาซินที่ตกค้างได้อย่างถูกต้องและมีประสิทธิภาพสูง |
| Other Abstract: | Enrofloxacin is a chemically synthetic antibiotic in fluoroquinolone group. It has been widely used in animal husbandry to control and treat diseases caused by both Gram positive and Gram negative bacteria. This practice might lead to drug residue in animal products, thus directly affecting the consumers. The residue can also enter the food chain, leading mutation and drug resistance in bacteria. Therefore, determination of enrofloxacin residue is essential. In this research, enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) test kits were developed. Among the four types of ELISA kit tested, direct competitive ELISA (Ag captured) was the most suitable type for test kit prototype preparation with the limit of detection (LOD) of 0.5 ppb and the detectable range of 0.5-25 ppb. The prototype test kit was highly specific to enrofloxacin. The %cross-reactivity with other antibiotics and fluoroquinlones were less than 0.01%. The developed test kit was tested on different samples including chicken muscle, cow milk and cow urine. It revealed the %recovery of 82-111%, 80-125% and 80-124%, respectively. Furthermore, comparative quantification of enrofloxacin using the developed ELISA test kit, the commercially available test kit (EURO-DIAGNOSTICA) and HPLC showed that all methods gave comparable results. In addition, the intra-assay and inter-assay variations of the developed test kit were also investigated and found to be 2.9-7.4% and 2.7-15.7%, respectively. These indicated that the developed prototype test kit in this study can be used to accurately and efficiently determine the enrofloxacin residue. |
| Description: | วิทยานิพนธ์ (วท.ม.)--จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย, 2550 |
| Degree Name: | วิทยาศาสตรมหาบัณฑิต |
| Degree Level: | ปริญญาโท |
| Degree Discipline: | เทคโนโลยีชีวภาพ |
| URI: | http://cuir.car.chula.ac.th/handle/123456789/38309 |
| URI: | http://doi.org/10.14457/CU.the.2007.312 |
| metadata.dc.identifier.DOI: | 10.14457/CU.the.2007.312 |
| Type: | Thesis |
| Appears in Collections: | Sci - Theses |
Files in This Item:
| File | Description | Size | Format | |
|---|---|---|---|---|
| Pitikarn_wo.pdf | 9.44 MB | Adobe PDF | View/Open |
Items in DSpace are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.