การทำให้บริสุทธิ์ของโปรตีนจาก Bacillus subtilis N3 ที่มีฤทธิ์ต้านราก่อโรคพืช Bipolaris sp.

สุดารัตน์ นุชวงษ์

Please use this identifier to cite or link to this item: https://cuir.car.chula.ac.th/handle/123456789/42659

Full metadata record

DC Field	Value	Language
dc.contributor.advisor	ปาหนัน เริงสำราญ	en_US
dc.contributor.author	สุดารัตน์ นุชวงษ์	en_US
dc.contributor.other	จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย. คณะวิทยาศาสตร์	en_US
dc.date.accessioned	2015-06-24T06:11:13Z
dc.date.available	2015-06-24T06:11:13Z
dc.date.issued	2556	en_US
dc.identifier.uri	http://cuir.car.chula.ac.th/handle/123456789/42659
dc.description	วิทยานิพนธ์ (วท.ม.)--จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย, 2556	en_US
dc.description.abstract	แบคทีเรีย B. subtilis N3 ที่คัดแยกได้จากดินสามารถผลิตโปรตีนที่มีฤทธิ์ในการยับยั้งรา Bipolaris sp. ที่ก่อโรคใบไหม้แผลเล็กในข้าวโพดได้ โดยวัตถุประสงค์ของงานวิจัยนี้คือการแยกและทำบริสุทธิ์โปรตีนที่มีฤทธิ์ในการยับยั้งราก่อโรคพืชจากน้ำเลี้ยงเชื้อของแบคทีเรียที่เลี้ยงในอาหารเลี้ยงเชื้อ Tryptic soy broth ที่ pH 7.5 และบ่มที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 18 ชั่วโมง ผลการทดลองพบว่าน้ำเลี้ยงเชื้อมีประสิทธิภาพในการยับยั้งราก่อโรคพืชได้ดี โดยมีเปอร์เซ็นต์การยับยั้งประมาณ 65 เปอร์เซ็นต์ และมีค่าแอกทิวิตีจำเพาะเท่ากับ 79.08 AUต่อมิลลิกรัมของโปรตีน โปรตีนที่มีฤทธิ์ในการยับยั้งราก่อโรคพืชสามารถแยกและทำบริสุทธิ์ได้ โดยการตกตะกอนโปรตีนด้วยแอมโมเนียมซัลเฟตที่ช่วงความเข้มข้น 40-80% ของแอมโมเนียมซัลเฟต โดยมีเปอร์เซ็นต์การยับยั้งเท่ากับ 80% และมีค่าแอกทิวิตีจำเพาะเท่ากับ 118.18 AUต่อมิลลิกรัมของโปรตีน จากนั้นทำบริสุทธิ์โปรตีนด้วยวิธีแอนไอออนเอกซ์เชนจ์ด้วยไดเอธิลอะมิโนเอธิล (DEAE Bio-gel A) โดยโปรตีนที่ผ่านการทำบริสุทธิ์ในช่วงลำดับส่วนที่ 45-50 (ตัวอย่างที่ 38) มีเปอร์เซ็นต์การยับยั้งเท่ากับ 62% และมีค่าแอกทิวิตีจำเพาะเท่ากับ 159.61 AUต่อมิลลิกรัมของโปรตีน เมื่อผ่านการทำโซเดียมโดเดซิลซัลเฟตพอลิอะคริลาไมด์เจลอิเล็กโทรฟอเรซิสพบว่ามีแถบโปรตีนเพียงแถบเดียว ซึ่งมีน้ำหนักโมเลกุลประมาณ 34.61 kDa จากการวิเคราะห์ด้วยวิธี Liquid Chromatography Quadrupole Time-of-Flight Tandem Mass Spectrometry พบว่ามีลายพิมพ์เพปไทด์ใกล้เคียงกับโปรตีนแฟลกเจลลินที่ผลิตจาก Bacillus amyloliquefacien subsp. plantarum โดยมีคะแนนความเหมือนของลำดับเพปไทด์เท่ากับ 52% นอกจากนี้เมื่อศึกษาลักษณะของสายใยและสปอร์ราก่อโรคพืชภายใต้กล้องจุลทรรศน์พบว่าโปรตีนที่แยกและทำบริสุทธิ์ได้สามารถยับยั้งการเจริญและการงอกของสปอร์ราก่อโรคพืช โดยความเข้มข้นของโปรตีนที่สามารถยับยั้งการเจริญของราก่อโรคพืชได้ 50% (IC50) มีค่าเท่ากับ 0.045 มิลลิกรัมต่อมิลลิลิตร นอกจากนี้โปรตีนที่แยกและทำบริสุทธิ์ได้สามารถป้องกันการรุกรานของรา Bipolaris sp. ที่ก่อโรคในใบข้าวโพดได้มากกว่า 89% ดังนั้นจากงานวิจัยนี้พบว่าโปรตีนที่แยกและทำบริสุทธิ์ได้จากแบคทีเรีย B. subtilis N3 สามารถนำไปประยุกต์ใช้ในการควบคุมปัญหาโรคใบไหม้แผลเล็กในข้าวโพดที่มีสาเหตุจากรา Bipolaris sp. ได้	en_US
dc.description.abstractalternative	B. subtilis N3, a soil borne bacterium, showed antifungal activity against Bipolaris sp. which is a causal agent of Southern corn leaf blight. The objective of this research was to isolate and purify the antifungal proteins from the culture filtrate of B. subtilis N3 which was produced by culturing the bacterium in tryptic soy broth medium, pH 7.5 at 30°C for 18 hours. The result indicated that the culture filtrate demonstrated 65% inhibition on mycelial growth and accounted for 79.08 AU/mg of specific activity. The antifungal protein was fractionated in 40-80% ammonium sulfate saturation, with around 80% inhibition and 118.18 AU/mg of specific activity. This protein was further purified by anion exchange chromatography on diethylaminoethyl (DEAE Bio-gel A). The purified antifungal fraction from fraction numbers 45-50 (sample 38) exhibited the highest level of antifungal activity of about 62% and 159.61 AU/mg of specific activity. Sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis revealed a single band with a molecular weight corresponded to 34.61 kDa. Liquid Chromatography Quadrupole Time-of-Flight Tandem Mass Spectrometry gave peptide fingerprint with significant similarity to flagellin from Bacillus amyloliquefacien subsp. plantarum with sequence coverage of 52%. Moreover, morphological study under microscope showed that the mycelial growth and conidia germination were significantly inhibited by the purified antifungal protein. The 50% inhibitory concentration (IC50) of the antifungal activity toward Bipolaris sp. was 0.045 mg/ml. Furthermore, the purified antifungal protein was able to prevent as well as protect disease development caused by Bipolaris sp. on corn leaves. The results from current investigation provide the evidence that the protein from B. subtilis N3 is applicable for the control of Southern corn leaf blight disease caused by Bipolaris sp.	en_US
dc.language.iso	th	en_US
dc.publisher	จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย	en_US
dc.relation.uri	http://doi.org/10.14457/CU.the.2013.134	-
dc.rights	จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย	en_US
dc.subject	สารต้านเชื้อรา
dc.subject	โรคเกิดจากเชื้อราในพืช
dc.subject	ข้าวโพด
dc.subject	Antifungal agents
dc.subject	Fungal diseases of plants
dc.subject	Corn
dc.title	การทำให้บริสุทธิ์ของโปรตีนจาก Bacillus subtilis N3 ที่มีฤทธิ์ต้านราก่อโรคพืช Bipolaris sp.	en_US
dc.title.alternative	PURIFICATION OF PROTEINS, FROM Bacillus subtilis N3, WITH ANTIFUNGAL ACTIVITY ON PHYTOPATHOGEN Bipolaris sp.	en_US
dc.type	Thesis	en_US
dc.degree.name	วิทยาศาสตรมหาบัณฑิต	en_US
dc.degree.level	ปริญญาโท	en_US
dc.degree.discipline	จุลชีววิทยาทางอุตสาหกรรม	en_US
dc.degree.grantor	จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย	en_US
dc.email.advisor	panan.r@chula.ac.th	en_US
dc.identifier.DOI	10.14457/CU.the.2013.134	-
Appears in Collections:	Sci - Theses

Files in This Item:

File	Description	Size	Format
5472132823.pdf		5.31 MB	Adobe PDF	View/Open

Show simple item record