การทำให้บริสุทธิ์และลักษณะสมบัติของอินูลิเนสจาก Streptomyces sp. CP01

นิโรบล เหลากลม

Please use this identifier to cite or link to this item: https://cuir.car.chula.ac.th/handle/123456789/47124

Full metadata record

DC Field	Value	Language
dc.contributor.advisor	ไพเราะ ปิ่นพานิชการ	-
dc.contributor.author	นิโรบล เหลากลม	-
dc.contributor.other	จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย. คณะวิทยาศาสตร์	-
dc.date.accessioned	2016-01-29T04:48:24Z	-
dc.date.available	2016-01-29T04:48:24Z	-
dc.date.issued	2554	-
dc.identifier.uri	http://cuir.car.chula.ac.th/handle/123456789/47124	-
dc.description	วิทยานิพนธ์ (วท.ม.)--จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย, 2554	en_US
dc.description.abstract	งานวิจัยนี้ศึกษาการทำอินูลิเนสจาก Streptomyces sp. CP01 ให้บริสุทธิ์โดยเลี้ยงเชื้อในอาหารเหลวที่มีอินนูลินสกัดจากรากแก่นตะวันเป็นแหล่งคาร์บอน นำน้ำเลี้ยงเชื้อมาตกตะกอนลำดับส่วนด้วยแอมโมเนียมซัลเฟตความเข้มข้ม 40-80 เปอร์เซ็นต์ ตามด้วยการทำคอลัมน์โครมาโทกราฟีสี่ขั้นตอน คือแมคโคร-เพรบดีอีเออี เซฟาคริลเอส-200เอชอาร์ ที-บิวทิลไฮโดรโฟบิคอินเตอร์แอคชัน และไฮดรอกซีอะปาไทด์ ได้เอนไซม์ที่มีความบริสุทธิ์เพิ่มขึ้นประมาณ 67 เท่า จากการวิเคราะห์น้ำหนักโมเลกุลโดยวิธีเจลฟิลเตรชันพบว่าเอนไซม์นี้มีน้ำหนักโมเลกุลประมาณ 73 กิโลดาลตัน และเมื่อวิเคราะห์โดยวิธีโซเดียมโดเดซิลซัลเฟตพอลิอะคริลาไมด์เจลอีเลคโทรโฟริซิสมีน้ำหนักโมเลกุลใกล้เคียงกันคือ 70.8 กิโลดาลตัน จากการศึกษาสมบัติของอินูลิเนสบริสุทธิ์พบว่าเอนไซม์มีอุณหภูมิและความเป็นกรดด่างที่เหมาะสมต่อการทำงาน คือ 55 องศาเซลเซียส และ 6.0 ตามลำดับ เอนไซม์มีความเสถียรต่ออุณหภูมิสูงถึง 50 องศาเซลเซียส และเสถียรต่อความเป็นกรดด่างในช่วงกว้างตั้งแต่ 6.0-9.0 เป็นเวลา 30 นาที จากการวิเคราะห์ผลิตภัณฑ์ที่ได้จากการย่อยอินนูลินโดยวิธีโครมาโทกราฟฟีแบบแผ่นบางพบว่าเอนไซม์นี้เป็นเอนโดอินูลิเนส สำหรับ ค่า Km ต่ออินนูลินและซูโครส เท่ากับ 2.36 และ 40 มิลลิโมลาร์ ตามลำดับ และค่า Vmaxต่ออินนูลินและซูโครส เท่ากับ 440 และ 12.3 ไมโครโมลต่อนาทีต่อมิลลิกรัม ตามลำดับ นอกจากนี้พบว่าสารดัดแปลงกรดอะมิโน ได้แก่ เอ็น-โบรโมซัคซินิไมด์และไอโอโดอะเซตะไมด์มีผลยับยั้งแอคติวิตีของเอนไซม์ แสดงว่ากรดอะมิโนทริปโตเฟนและซีสเทอีนน่าจะเกี่ยวข้องกับบริเวณ active site ของเอนไซม์	en_US
dc.description.abstractalternative	Inulinase was purified from the culture filtrate of Streptomyces sp. CP01 grown in liquid medium containing inulin extract from Jerusalem artichoke as a carbon source. The enzyme was purified to approximately 67 fold-purity by fractionation with 40-80% saturation of ammonium sulfate followed by four consecutive column chromatography steps on Macro-prep DEAE, Sephacryl S-200, t-butyl hydrophobic interaction and hydroxyapatite, respectively. The apparent molecular weight of the purified enzyme was 73 kDa as estimated by gel filtration and 70.8 kDa estimated by SDS-PAGE. The purified enzyme is optimally active at 55 C and pH 6.0. It is stable at temperature up to 50 C and at a broad range of pH from 6.0-9.0 after 30 min. Analysis of inulin hydrolysis- products by thin layer chromatography indicated that this enzyme is endoinulinase. Its Km values for inulin and sucrose were 2.36 and 40 mM, respectively, and its Vmax values are 440 and 12.3 mM/min/mg, respectively. When the enzyme was treated with N-bromosuccinimide and iodoacetamide, amino acid modifying agents, its activity was reduced indicating tryptophan and cystein may involve in the active site of the enzyme.	en_US
dc.language.iso	th	en_US
dc.publisher	จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย	en_US
dc.relation.uri	http://doi.org/10.14457/CU.the.2011.2039	-
dc.rights	จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย	en_US
dc.subject	อินูลิน	en_US
dc.subject	สเตรปโตมัยซิส	en_US
dc.subject	Inulin	en_US
dc.subject	Streptomyces	en_US
dc.title	การทำให้บริสุทธิ์และลักษณะสมบัติของอินูลิเนสจาก Streptomyces sp. CP01	en_US
dc.title.alternative	Purification and characterization of inulinase from Streptomyces sp. CP01	en_US
dc.type	Thesis	en_US
dc.degree.name	วิทยาศาสตรมหาบัณฑิต	en_US
dc.degree.level	ปริญญาโท	en_US
dc.degree.discipline	จุลชีววิทยาทางอุตสาหกรรม	en_US
dc.degree.grantor	จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย	en_US
dc.email.advisor	ppairoh@chula.ac.th	-
dc.identifier.DOI	10.14457/CU.the.2011.2039	-
Appears in Collections:	Sci - Theses

Files in This Item:

File	Description	Size	Format
nirobol_la.pdf		78.95 MB	Adobe PDF	View/Open

Show simple item record