การศึกษาโรคติดเชื้อราชนิดลุกลามในโพรงจมูกและไซนัสโดยวิธีพีซีอาร์ซีเควนซิ่งจากชิ้นเนื้อทางพยาธิวิทยา

Abstract

บทคัดย่อ ความเป็นมา โรคโพรงจมูกอักเสบจากเชื้อราชนิดลุกลามเป็นโรคที่มีความรุนแรงโดยพบอัตราการพิการและการตายที่สูง หากไม่ได้รับการวินิจฉัยที่รวดเร็วหรือต้องคอยผลการยืนยันชนิดของเชื้อก่อโรค อาจทำให้การเริ่มต้นรักษายืดออกไป ก่อให้เกิดการแพร่กระจายการติดเชื้อนำไปสู่การตายได้ จุดมุ่งหมาย 1) เพื่อออกแบบไพรเมอร์ที่ใช้ตรวจหาชนิดของเชื้อราที่พบบ่อยในโรคนี้ 2) เพื่อหาความชุกของเชื้อราในเนื้อเยื่อตัวอย่างผู้ป่วยด้วยโรคนี้ วิธีการทดลอง ตัวอย่างในการทดลองเป็นเนื้อเยื่อที่ผ่านการแช่ฟอร์มาลีนและฝังในพาราฟีน จากนั้นนำมาตรวจยืนยันเชื้อราที่เห็นจากกล้องจุลทรรศน์อีกครั้ง แล้วจึงนำตัวอย่างมาตัดและทำการสกัดดีเอ็นเอเก็บไว้เพื่อทำพีซีอาร์ เริ่มจากการทำพีซีอาร์โดยใช้ไพรเมอร์ ZP3 (housekeeping) ตามด้วยไพรเมอร์ panfungal และไพรเมอร์ที่จำเพาะกับเชื้อราที่ออกแบบมาใหม่เรียกว่าไพรเมอร์ differentiated ผลการทดลอง จากจำนวนผู้ป่วย 81 ราย พบว่ามีเนื้อเยื่อตัวอย่างที่สามารถเพิ่มจำนวนดีเอ็นเอจนตรวจสอบด้วยไพรเมอร์ differentiated และทำ PCR-sequencing ได้ผลอยู่ 20 ราย ใน 20 รายนี้ 9 ราย (45%) มีการติดเชื้อ Aspergillus sp. 4 ราย (20%) ติดเชื้อ Candida sp. 4 ราย (20%) ติดเชื้อ Cladosporium sp. 1 ราย (5%) ติดเชื้อ Mucor sp. 1 ราย (5%) ติดเชื้อ Alternaria sp. และ 1 ราย (5%) ติดเชื้อ Dendryphiella sp. โดยไม่พบว่ามีการติดเชื้อ Fusarium sp.ในการทดลองนี้ สรุปผลการทดลอง โดยสรุปแล้วไพรเมอร์ที่ออกแบบมาสามารถใช้หาชนิดของเชื้อราได้อย่างจำเพาะ ซึ่งมีประโยชน์สำหรับแพทย์ในการรักษาโรคได้ทันเวลา นอกจากนี้สามารถให้ยาต้านเชื้อราต่อเชื้อที่พบได้บ่อยที่สุดจากการศึกษานี้ได้ในช่วงตอนต้นของการเกิดโรคโดยยังไม่ต้องทราบชนิดของเชื้อราหรือในระหว่างการรอผลทางห้องปฏิบัติการ