การกดการทำงานของ up-regulated A-repeats ของยีนในมะเร็งปากมดลูกด้วย PNAs-A15

Abstract

Mononucleotide A- and T- repeats ถูกพบบริเวณรอบๆ transcription start sites (TSS) ซึ่งเกี่ยวข้องกับการควบคุมการแสดงออกของยีนผ่านทาง Argonaute proteins นอกจากนี้ยังพบว่า A- and T- repeats สายสั้น (<10 bp) มักพบมากใน tissue-specific genes ในขณะที่ A- and T- repeats สายยาว (≥10 bp) มักพบมากใน housekeeping genes ในงานวิจัยนี้ได้ทำการออกแบบ peptide nucleic acid (PNA) ที่เป็นเบสเรียงต่อกัน 15 ตัว เพื่อรบกวนการทำงานของโปรตีนที่จับกับ A-repeats และเปลี่ยนแปลงระดับ mRNA ในยีนที่มี A- and T- repeats โดยการใส่ PNA-A15 เข้าสู่เซลล์ พบว่าสามารถยับยั้งการเพิ่มจำนวนของเซลล์มะเร็งปากมดลูก (HeLa และ C33A) แต่ไม่มีผลต่อเซลล์ปกติ (HK-2) ด้วยการทำ MTT assay และ anchorage-independent growth assay จากนั้นศึกษาผลของ PNAs-A15 ที่มีต่อการแสดงออกระดับโปรตีนของเซลล์มะเร็งปากมดลูก (HeLa cells) ใน formalin-fixed paraffin-embedded cells blocks ด้วยวิธี Immunocytochemistry ผลการศึกษานี้พบว่า PNAs-A15 ทำให้เกิดการเปลี่ยนแปลงการแสดงออกระดับโปรตีนของเซลล์มะเร็งปากมดลูก และเมื่อศึกษาการแสดงออกของยีนในมะเร็งโดยใช้ expression profiles จาก GEO database มาวิเคราะห์ จะพบ A- and T- repeats สายยาว (13-27 bp) จำนวนมากใน up-regulated genes ในมะเร็งหลายชนิด เช่น มะเร็งปากมดลูก เป็นต้น นอกจากนี้ยังศึกษาการเปลี่ยนแปลงของการแสดงออกของยีนในมะเร็งปากมดลูก 2 ชนิดคือ HeLa และ C33A ที่มีการใส่ PNA-A15 พบว่าระดับการแสดงออกของยีนที่เพิ่มขึ้นมีความสัมพันธ์กับ repeat densities จึงสรุปได้ว่า PNAs-A15 สามารถลดการแสดงออกของยีนที่มี A-repeats และลดการเพิ่มจำนวนของเซลล์มะเร็งได้ ซึ่งอาจนำความรู้นี้ไปต่อยอดเพื่อพัฒนาวิธีการรักษามะเร็งได้ในอนาคต