สภาวะที่เหมาะสมสำหรับการเติบโตของแบคทีเรียชอบเค็ม ที่ผลิตโปรติเอส

Abstract

ในการลดระยะเวลาหมักเพื่อผลิตน้ำปลา อาจเติมแบคทีเรียชอบเค็มที่ผลิตโปรติเอสที่มีแอคติวิตีสูงลงในถังหมัก ได้แยกแบคทีเรียชอบเค็มสูง 13 ไอโซเลท จากถังหมักน้ำปลาหลังการหมัก 2 เดือน เป็นเชื้อที่ผลิตทั้งเอนไซม์เคซิเนสและเจลลาทินเนสบนอาหารวุ้นมีเดียม 73 ทึ่ความเข้มข้นโซเดียมคลอไรด์ 25 เปอร์เซ็นต์ จำนวน 5 ไอโซเลท มีเพียง 1 ไอโซเลท คือแบคทีเรียชอบเค็มหมายเลข 8 ที่ผลิตเอนไซม์เคซิเนสในอาหารเลี้ยงเชื้อเหลว แบคทีเรียนี้เจริญได้ดีและผลิตโปรติเอสในรูปเคซิเนสที่มีแอคติวิตีสูงในอาหารเลี้ยงเชื้อมีเดียม 73 ที่ความเข้มข้นโซเดียมคลอไรด์ 25 เปอร์เซ็นต์ ผลการแปรชนิดและความเข้มข้นของแหล่งคาร์บอนและไนโตรเจนพบว่า แบคทีเรียชอบเค็มหมายเลข 8 ต้องการแหล่งไนโตรเจนอื่น เพิ่มเติมจากเจลลาทิน เช่น กรดแคสอะมิโน, ผงสกัดจากยีสต์ หรือแอมโมเนียมคลอไรด์ เมื่อเติมแหล่งไนโตรเจนเหล่านี้ลงในมีเดียม 73 ที่มีเจลลาทิน 0.5 เปอร์เซ็นต์ ผลการทดลองพบว่าแอมโมเนียมคลอไรด์ทำให้การเจริญลดลง แต่โปรติเอสแอคติวิตีใกล้เคียงกับเมื่อเติมกรดแคสอะมิโน หรือผงสกัดจากยีสต์ที่ความเข้มข้นเดียวกัน ผลการทดลองนี้แสดงว่าแอมโมเนียมคลอไรด์เพิ่มแอคติวิตีของโปรติเอส หลังจากแปรชนิดและความเข้มข้นของแหล่งคาร์บอนและไนโตรเจน, เกลือแร่, ความเป็นกรดด่างเริ่มต้นและอุณหภูมิพบว่า อาหารเลี้ยงเชื่อที่เหมาะสมที่จะทำให้แบคทีเรียชอบเค็มหมายเลข 8 เจริญได้ใกล้เคียงและผลิตโปรติเอสได้สูงอย่างมีนัยสำคัญเมื่อเทียบกับคอนโทรล (มีเดียม 73) ประกอบด้วย เจลลาทิน 1.0 เปอร์เซ็นต์ กรดแคสอะมิโน 0.05 เปอร์เซ็นต์ แอมโมเนียมคลอไรด์ 0.05 เปอร์เซ็นต์ โซเดียมคลอไรด์ 25 เปอร์เซ็นต์ โปแตสเซียมคลอไรด์ 0.5 เปอร์เซ็นต์และแคลเซียมคลอไรด์ 0.02 เปอร์เซ็นต์ pH 7.0 อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส กลูโคสทำให้แบคทีเรียเจริญและมีแอคติวิตีน้อยกว่าเจลลาทิน ผลการทดลองพบว่าโปรติเอสของแบคทีเรียนี้เป็นอัลคาไลด์โปรติเอส มีแอคติวิตีสูงสุดที่ pH 8.0-9.0 จากการจัดจำแนกแบคทีเรียชอบเค็มหมายเลข 8 นี้พบว่ามีสมบัติใกล้เคียงกับแบคทีเรียในกลุ่ม Halobacterium แบคทีเรียนี้มีรูปร่างเป็นแท่ง โคโลนีกลม โปร่งแสงและมีสีชมพู ภาพจากกล้องจุลทรรศน์อิเล็คตรอน แสดงให้เห็นถึงผนังเซลล์มีลักษณะหยัก มีเยื่อหุ้มเซลล์เมมเบรน นิวคลีโอพลาสึมและออร์กาแนลลักษณะเป็นแถบทึบอิเล็คตรอน