ความหลากหลายทางพันธุกรรมของ Bacillus subtilis โดยเทคนิค randomly amplified polymorphic DNA

Abstract

การศึกษาปริมาณแบคทีเรียในดินตัวอย่างที่เก็บได้จากพื้นที่ต่าง ๆ ในบริเวณศูนย์ศึกษาพัฒนาห้วยฮ่องไคร้ อันเนื่องมาจากพระราชดำริ พบว่ามีปริมาณแบคทีเรียทั้งหมดแปรผันอยู่ระหว่าง 2.7 x 105 – 5.2 x 107 โคโลนี/กรัมของดิน ดินตัวอย่างมีความชื้ออยู่ในช่วงร้อยละ 4.03 – 37.13 ค่าพีเอชอยู่ในช่วง 5.0-7.69 เปอร์เซ็นต์และค่าอินทรีย์สารอยู่ในช่วง 7.12 – 15.73 เปอร์เซ็นต์ B. subtilis ที่คัดแยกได้จำนวน 35 ไอโซเลท เมื่อทดสอบความสามารถในการยับยั้งการเจริญเติบโตของเชื้อรา Fusarium oxysporum, Phytophthora parasitica, Phytophthora palmivora, Bipolaris oryzae, Pyricularia grise และ Collectotrichum glyeosporioides พบว่าเชื้อแต่ละไอโซเลท สามารถยับยั้งการเจริญเติบโตของเชื้อราได้แตกต่างกัน เมื่อตรวจสอบลายพิมพ์ดีเอ็นเอ โดยใช้เทคนิค RAPD PCR ด้วยไพรเมอร์ 10 ชนิด พบว่าไพรเมอร์ 8 ชนิด สามารถให้ผลิตผลพีซีอาร์ได้ หลังจากนั้นได้เลือกไพรเมอร์ 4 ชนิด ที่สามารถเพิ่มปริมาณผลิตผลของพีซีอาร์ได้ชัดเจน มาตรวจสอบลายพิมพ์ดีเอ็นเอของ B subtilis 35 ไอโซเลท พบว่าสามารถแยกความแตกต่างของ B. subtilis แต่ละไอโซเลทได้อย่างชัดเจน และพบว่าบางไอโซเลทมีลายพิมพ์ดีเอ็นเอเหมือนกัน เมื่อวิเคราะห์ความสัมพันธ์โดยใช้คอมพิวเตอร์โปรแกรม RAPDistance สามารถยืนยันได้ว่าเชื้อที่มีลายพิมพ์ดีเอ็นเอเหมือนกัน เป็นเชื้อเดียวกัน และแบ่งกลุ่ม B. subtilis ทั้ง 35 ไอโซเลท ออกเป็น 4 กลุ่ม ซึ่งพบว่าการแบ่งกลุ่มโดยวิธี RAPD มีความสัมพันธ์กันกับผลการยับยั้งการเจริญเติบโตของเชื้อราโรคพืช 5 ชนิด