ผลของไคโตซานที่มีต่อการแสดงออกของยีนในกล้วยไม้สกุลหวาย 'เอียสกุล'

Abstract

การศึกษาครั้งนี้เป็นการเปรียบเทียบการแสดงออกของยีนในกล้วยไม้สกุลหวาย ‘เอียสกุล’ ที่ได้รับไคโตซาน และไม่ได้รับไคโตซาน ด้วยวิธี Differentia display ไคโตซานที่ใช้ในการศึกษาวิจัยอยู่ในรูปโอลิโกเมอร์ที่ได้จาการเตรียมด้วยวิธีทางเอนไซม์ ซึ่งมี degree of deacetylation เป็น 80% ที่ความเข้มข้น 10 ppm จากการศึกษาการสกัด total RNA ของกล้วยไม้สกุลหวาย ‘เอียสกุล’ การปรับเปลี่ยนองค์ประกอบของ extraction buffer ของ Yu และ Goh (2000) โดยการใช้สาร polyvinylpolypyrrolidoneแทนการใช้สาร polyvinylpyrrolidone มีผลช่วยเพิ่มประสิทธิภาพของการสกัด total RNA เพื่อใช้ในการเปรียบเทียบการแสดงออกของยีนในกล้วยไม้ชนิดนี้ การแยกรูปแบบการแสดงออกของยีนที่แตกต่างกันในใบอ่อนของต้นที่ได้รับไคโตซาน และไม่ได้รับไคโตซาน โดยใช้ oligo dT₁₁NN ไพรเมอร์ จำนวน 8 ไพรเมอร์ ร่วมกับไพรเมอร์แบบสุ่ม จำนวน 9 ไพรเมอร์ พบว่ามี cDANที่แสดงความแตกต่างจำนวน 145 แถบ ซึ่งมีเพียง 19 ชิ้น cDAN ที่สามารถโคลน และวิเคราะห์ลำดับนิวคลีโอไทด์ได้ จาก cDAN ดังกล่าวพบว่ามี cDAN จำนวน 11 ชิ้น ที่มีความคล้ายคลึงกับลำดับนิวคลีโอไทด์ และ/หรือลำดับกรดอะมิโน ที่พบในสิ่งมีชีวิตอื่น ในจำนวนนี้มี cDAN จำนวน 5 ชิ้น ที่มีความคล้ายคลึงกับจีโนมของพืชชนิดอื่น ส่วนเมื่อทำการแปลรหัส พบว่าสายโพลีเปปไทด์ที่แปลรหัสจาก cDAN ได้ จำนวน 4 สาย ที่มีความคล้ายคลึงกับสายโพลีเปปไทด์ของแบคทีเรีย และอีก 6 สายมีความคล้ายคลึงกับสายโพลีเปปไทด์ที่พบในพืช จากผลการเปรียบเทียบการแสดงออกของชิ้นส่วน cDAN หมายเลข De362 และDe7696 (ซึ่งเหมือนกับ De164) ในใบอ่อนที่ได้รับไคโตซาน และไม่ได้รับไคโตซาน โดยวิธี reverse transcription-polymerase chain reaction พบว่าชิ้นส่วน cDAN หมายเลข De362 ซึ่งมีความคล้ายคลึงกับ cDAN ที่พบในเนื้อเยื่อเจริญของข้าวฟ่างและชิ้นส่วน cDAN หมายเลข De7696 ซึ่งมีลำดับนิวคลีโอไทด์คล้ายคลึงกับยีน Ycf2 ในคลอโรพลาสต์จีโนมมีการแสดงออกลดลงหลังจากได้รับไคโตซาน เป็นเวลา 24 ชั่วโมง จากข้อมูลข้างต้นทำให้ทราบว่าไคโตซานมีผลต่อการแสดงออกของยีนในคลอโรพลาสต์ ซึ่งเป็นรายงานชิ้นแรก ในขณะที่รายงานส่วนใหญ่พบผลของไคโตซานที่มีต่อยีนที่เกี่ยวข้องกับการสร้างสารป้องกันตนเองของพืช