การโคลนยีนเอกโซนิวคลีเอสของ Plasmodium falciparum ด้วยวิธี overlapping PCR

ปรมัตถ์ เลาหกรรณวนิช

Please use this identifier to cite or link to this item: https://cuir.car.chula.ac.th/handle/123456789/78920

Title:	การโคลนยีนเอกโซนิวคลีเอสของ Plasmodium falciparum ด้วยวิธี overlapping PCR
Other Titles:	Molecular cloning of exonuclease from Plasmodium falciparum using overlapping PCR
Authors:	ปรมัตถ์ เลาหกรรณวนิช
Advisors:	วันชัย อัศวลาภสกุล
Other author:	จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย. คณะวิทยาศาสตร์
Subjects:	การโคลนยีน การดื้อยา มาลาเรีย พลาสโมเดียมฟัลซิปารัม Molecular cloning Drug resistance Malaria Plasmodium falciparum
Issue Date:	2563
Publisher:	จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย
Abstract:	ปัจจุบันโรคมาลาเรียยังคงเป็นปัญหาหลักทางสาธารณสุขในหลายประเทศทั่วโลก แม้จะมีรายงานจำนวนของผู้ป่วยมาลาเรียลดลงอย่างต่อเนื่อง อย่างไรก็ตามในปี 2018 ยังคงมีการรายงาน ผู้ป่วยมาลาเรียสูงถึง 228 ล้านราย และประมาณการว่ามีผู้เสียชีวิตจากโรคดังกล่าว 405,000 ราย โรคมาลาเรียเกิดจากโปรโตซัวในสกุล Plasmodium sp. โดยปรสิตที่ก่อให้เกิดโรคมาลาเรียได้รุนแรงที่สุด คือ Plasmodium falciparum และเมื่อไม่นานมานี้พบว่ามีอัตราการดื้อยา Dihydroartemisinin-piperaquine ที่เป็นยาที่ใช้ในการรักษาโรคมาลาเรียสูงจากงานวิจัยที่ตีพิมพ์ในปี 2020 ได้ศึกษาเครื่องหมายทางพันธุกรรม ที่มีความเกี่ยวข้องกับการดื้อยา piperaquine และว่ายีนเอกโซนิวคลีเอสมีส่วนเกี่ยวข้องกับการดื้อยา piperaquine ดังนั้นโครงการนี้มีวัตถุประสงค์ที่จะเพิ่มปริมาณเอกโซนิวคลีเอสของ P.falciparum และสร้างรีคอมบีแนนท์พลาสมิด วิธีการทดลองเริ่มจากเพิ่มจำนวนยีนเอกโซนิวคลีเอส Exon 1 และ Exon 2 ของ P.falciparum ด้วยวิธีการ PCR โดยใช้ genomic DNA เป็นต้นแบบและเชื่อมต่อ Exon ทั้ง 2 ส่วนด้วยวิธี overlapping PCR เพื่อนำไปสร้างรีคอมบีแนนท์พลาสมิด หลังจากนั้น transformation เข้าสู่ DH5 Alpha competent E. coli เพื่อเพิ่มจำนวนรีคอมบีแนนท์พลาสมิด ผลการทดลองแสดงให้เห็นว่า Exon แต่ละส่วนความยาว 949 และ 1,193 คู่เบสตามลำดับ สามารถเชื่อมกันด้วยวิธี overlapping PCR ได้ผลิตภัณฑ์พีซีอาร์ขนาด 2,142 คู่เบส อย่างไรก็ตามยังไม่ประสบความสำเร็จในการ transformation ยีนเอกโซนิวคลีเอสเข้าสู่ DH5 Alpha competent E. coli
Other Abstract:	Malaria remains one of the major public health problems in more than 100 endemic countries worldwide. Even though the numbers of malaria cases are decreasing, there were still 228 million estimated cases and 405,000 deaths globally in 2018. Plasmodium falciparum is the most virulent human parasite responsible for the majority of mortality cases. Recently, the spread of dihydroartemisinin-piperaquine resistance is the first-line drug treatment for uncomplicated P. falciparum. Researches in 2020 have studied the genetic markers which was associated with piperaquine resistance. The exonuclease was found to be involved in drug resistance. The objective of this research was to clone the P. falciparum exonuclease gene to increase DNA content and generate recombinant plasmid. First, exonuclease gene of P. falciparum was multiplied by conventional PCR using the genomic DNA as a template and the exon segments were joined by overlapping PCR to construct the recombinant plasmid. Afterwards, the plasmids were transformed into DH5 Alpha competent E. coli to increase the number of recombinant plasmids. The results showed that the exon fragments length 949 bp and 1,193 bp, respectively, could be splicing by overlapping PCR to obtain 2,142 bp DNA. However, the transformation exon of the exonuclease to DH5 Alpha competent E.coli has not been successful.
Description:	โครงงานเป็นส่วนหนึ่งของการศึกษาตามหลักสูตรปริญญาวิทยาศาสตรบัณฑิต ภาควิชาจุลชีววิทยา คณะวิทยาศาสตร์ จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย ปีการศึกษา 2563
URI:	http://cuir.car.chula.ac.th/handle/123456789/78920
Type:	Senior Project
Appears in Collections:	Sci - Senior Projects

Files in This Item:

File	Description	Size	Format
63-SP-MICRO-010 - Poramut Laohakan.pdf		26.25 MB	Adobe PDF	View/Open

Show full item record