การปรับปรุงสายพันธุ์ streptococcus zooepidemicus ATcc 35246 เพื่อการผลิตกรดไฮยาลูโรนิค

Abstract

Streptococcus zooepidemicus ATCC 35246 เป็นสายพันธุ์ตั้งต้นที่ได้จาก American Type Culture Collection สามารถผลิตกรดไฮยาลูโรนิคได้ 180.23 มิลลิกรัมต่อลิตรภายใต้ภาวะที่ทดสอบ เมื่อกลายพันธุ์สายพันธุ์นี้โดยการฉายแสงอัลตราไวโอเลตนาน 80-120 วินาที จำนวน 3 รอบ สามารถคัดเลือกสายพันธุ์ CU47 ซึ่งผลิตกรดไฮยาลูโรนิคได้ 370.13 มิลลิกรัมต่อลิตร และเมื่อกลายพันธุ์ต่อด้วย NTG (N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine) ที่ความเข้มข้น 50 ไมโครกรัมต่อมิลลิลิตร เป็นเวลา 5-40 นาที 37 องศาเซลเซียส จะได้สายพันธุ์กลายที่ผลิตกรอไฮยาลูโรนิคได้สูงจำนวนหนึ่ง หลังการคัดเลือกและกลายพันธุ์ซ้ำด้วย NTG อีก 4 รอบ ได้สายพันธุ์ CUN 5-10 ซึ่งผลิตกรดไฮยาลูโรนิคได้ 585.85 มิลลิกรัมต่อลิตร เมื่อศึกษาภาวะที่เหมาะสมในการผลิตกรดไฮยาลูโรนิคโดยสายพันธุ์ CUN5-10 พบว่า การเลี้ยงที่อุณหภูมิห้อง (28-32 องศาเซลเซียส) ค่าความเป็นกรด-ด่างเริ่มต้นของอาหารเลี้ยงเชื้อ 7.5 ปริมาณซูโครสเริ่มต้นที่ 10 กรัมต่อลิตร อัตราเร็วในการเขย่า 200 รอบต่อนาที จุลินทรีย์ผลิตกรดไฮยาลูโรนิคได้ 829.11 มิลลิกรัมต่อลิตร และการเติมไลโซไซม์ที่ 40,000 ยูนิต ลงในเซลล์เพาะเลี้ยง สามารถเพิ่มปริมาณการผลิตกรดไฮยาลูโรนิคได้สูงเพิ่มเป็น 2.50 กรัมต่อลิตร ในขณะที่การเติมทวีน 80 ที่ความเข้มข้น 0-2 เปอร์เซ็นต์ (ปริมาตรต่อปริมาตร) ไม่มีผลต่อการเพิ่มการผลิตกรดไฮยาลูโรนิคแต่อย่างใด