การพัฒนาวิธีเอนไซม์ลิงก์อิมมิวโนซอร์เบนต์แอสเสย์สำหรับตรวจเคซีนจากวัว : รายงานการวิจัยฉบับสมบูรณ์

ทรงจันทร์ ภู่ทอง; กิตตินันท์ โกมลภิส; อุมาพร พิมพิทักษ์; อนุมาศ บัวเขียว

Please use this identifier to cite or link to this item: https://cuir.car.chula.ac.th/handle/123456789/81950

Full metadata record

DC Field	Value	Language
dc.contributor.author	ทรงจันทร์ ภู่ทอง	-
dc.contributor.author	กิตตินันท์ โกมลภิส	-
dc.contributor.author	อุมาพร พิมพิทักษ์	-
dc.contributor.author	อนุมาศ บัวเขียว	-
dc.contributor.other	จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย. สถาบันวิจัยเทคโนโลยีชีวภาพและวิศวกรรมพันธุศาสตร์	-
dc.date.accessioned	2023-02-20T06:51:49Z	-
dc.date.available	2023-02-20T06:51:49Z	-
dc.date.issued	2561	-
dc.identifier.uri	http://cuir.car.chula.ac.th/handle/123456789/81950	-
dc.description.abstract	น้ำนมวัวเป็นอาหารหลักที่สำคัญชนิดหนึ่งสำหรับทั้งเด็กและผู้ใหญ่ อย่างไรก็ตามมีการพบว่ามีเด็กบางคนไม่สามารถบริโภคน้ำนมวัวได้เนื่องจากมีอาการแพ้ ซึ่งมีสาเหตุส่วนใหญ่มาจากการแพ้เคซีน (casein, CN) ที่พบมากถึง 80% ของโปรตีนในน้ำนม ดังนั้นผู้บริโภคกลุ่มนี้ต้องหลีกเลี่ยงการบริโภคน้ำนมวัวหรืออาหารที่มีน้ำนมวัวเป็นส่วนผสม ดังนั้นในงานวิจัยนี้จึงมีวัตถุประสงค์เพื่อจะสร้างมอนอโคลนที่สามารถผลิตมอนอโคลนอลแอนติบอดี (Mab) ต่อเคซีนจากวัว ที่มีลักษณะสมบัติเหมาะสมสำหรับนำมาใช้เตรียมชุดตรวจเคซีน โดยได้ทำการฉีดกระตุ้นหนูทดลองและเตรียมเซลล์ไฮบริโดมาด้วยวิธีการหลอมรวมเซลล์ที่ใช้กันทั่วไป พบว่าสามารถเตรียม Mab ได้ทั้งสิ้น 60 มอนอโคลน จากเซลล์หลุมต้นกำเนิด 13 หลุม จากการศึกษาลักษณะสมบัติพบว่า Mab มีไอโชไทป์เป็น IgG₁ 46 โคลน IgG₂a 5 โคลน และ IgM 9 โคลน แยกเป็นกลุ่มได้เป็น 7 กลุ่มตามความจำเพาะในการจับกับเคซีนชนิดต่าง ๆ ได้แก่ CN, αs-CN, β-CN, k-CN รวมทั้งแลกโตโกลบูลินและโอวัลบูมิน จึงได้ทำการคัดเลือก Mab มา 10 ตัว ที่จับ CN ได้แต่ไม่จับกับแลกโตโกลบูลินและโอวัลบูมิน ไปศึกษาความจำเพาะของ Mab ต่ออิพิโทปที่ต่างกันบนโมเลกุลของ CN พบว่ามี Mab 8 ตัวที่อาจจับกับ CN ที่อิพิโทปต่างกันได้แก่ CN1F4, CN3F4, CN5F4, CN10F4, CN11F4, CN12F4, CN16F4 และ CN20F4 นำ Mab ทั้ง 8 ตัวมาทดสอบความไวในการตรวจเคซีนจากวัวด้วยวิธี indirect enzyme-linked immunosorbent assay พบว่ามีค่าความเข้มข้นในการยับยั้งที่ 50% (IC₅₀) อยู่ในช่วง 6.1-21.5 นาโนกรัมต่อมิลลิลิตร โดย Mab CN1F4 มีความไวสูงสุดซึ่งมีค่าขีดจำกัดในการตรวจและ IC₅₀ เท่ากับ 2.46±0.01 และ 17.01 ±4.29 ไมโครกรัมต่อมิลลิลิตร ตามลำดับ ดังนั้นจึงเลือก Mab CN1F4 สำหรับการศึกษาต่อไป	en_US
dc.description.abstractalternative	Cow milk is an important source of foods for both children and adults. However, it has Cow milk is an important source of foods for both children and adults. However, it has been found that some children are allergic to cow milk. This allergy is mainly caused by casein (CN) which can be found up to 80% of the total milk proteins. Therefore, these consumers must avoid cow milk and foods containing cow milk and drink other types of milk. However, due to the low price of cow milk, it can be mixed with other types of milk. Therefore, a simple method is required for cow milk detection. Currently, the most widely used screening test is antibody based method in the form of strip test or lateral flow immunoassay because it is easy to use, convenient and inexpensive. Of the research, the objective was to generate monoclones which produce monoclonal antibody (MAb) that is specific to cow casein and is suitable for detection purpose. Mice were immunized and conventional cell fusion between splenocytes and myeloma cells was performed to generate hybridoma cells which were screened to obtain 60 monoclones from thirteen originated clones. Among the 60 MAbs, 46 MAbs were found to be IgG1 isotype while 5 MAbs and 9 MAbs were found to be IgG₂a and IgM isotype, respectively. The MAbs were categorized into 7 groups depending on the ability to bind with different types of CNs such as mixed form of CN, αs-CN, β-CN, k-CN and with lactoglobulin as well as with ovalbumin. Ten MAbs were selected for further study because they bound with CNs and did not bind with lactoglobulin and ovalbumin. Binding ability of the MAbs on different sites or epitopes of CN was studied. Eight MAbs such as CN1F4, CN3F4, CN5F4, CN10F4, CN11F4, CN12F4, CN16F4 และ CN20F4 were found to bind at different epitopes. Sensitivity of the selected MAbs was studied using an indirect enzyme-linked immunosorbent assay. The 50% inhibition concentration (IC₅₀) was found to be in a range of 6.1 – 21.5 ng/ml. The most sensitive Mab was CN1F4 of which the limit of detection (LOD) and IC₅₀ were 2.46 ± 0.01 μg/mL and 17.01 ± 4.29 μg/mL, respectively. As a results, MAb CN1F4 was chosen for further studies.	en_US
dc.description.sponsorship	ได้รับทุนอุดหนุนการวิจัยจากกองทุนรัชดาภิเษกสมโภช ปีงบประมาณ 2561 สัญญาเลขที่ GB-B_CU_61_07_61_01	en_US
dc.language.iso	th	en_US
dc.publisher	สถาบันวิจัยเทคโนโลยีชีวภาพและวิศวกรรมพันธุศาสตร์ จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย	en_US
dc.rights	สถาบันวิจัยเทคโนโลยีชีวภาพและวิศวกรรมพันธุศาสตร์ จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย	en_US
dc.subject	น้ำนม	en_US
dc.subject	เคซีน	en_US
dc.subject	โปรตีนนม	en_US
dc.title	การพัฒนาวิธีเอนไซม์ลิงก์อิมมิวโนซอร์เบนต์แอสเสย์สำหรับตรวจเคซีนจากวัว : รายงานการวิจัยฉบับสมบูรณ์	en_US
dc.title.alternative	Development of enzyme-linked immunosorbent assay for detecting bovine casein	en_US
dc.type	Technical Report	en_US
Appears in Collections:	Biotec - Research Reports

Files in This Item:

File	Description	Size	Format
Songchan Pu_Res_2018.pdf	รายงานการวิจัยฉบับเต็ม (Fulltext)	44.47 MB	Adobe PDF	View/Open

Show simple item record