Abstract:
เปปไทด์ต้านจุลชีพเป็นเปปไทด์สายสั้นที่มีความสำคัญต่อระบบภูมิคุ้มกันของร่างกายของสิ่งมีชีวิตหลายชนิดโดยมีคุณสมบัติที่สามารถต่อต้านการติดเชื้อที่เกิดจากจุลชีพได้ ในงานวิจัยนี้ได้ทำการค้นหาลำดับนิวคลีโอไทด์ที่สมบูรณ์(full length cDNA) ของยีนเปปไทด์ต้านจุลชีพครัสติน(CrusSp)ศึกษาลักษณะสมบัติของยีนรวมทั้งแยกและวิเคราะห์การจัดเรียงตัวของยีน(genomicorganization)จากการค้นหาลำดับนิวคลีโอไทด์ที่สมบูรณ์ของยีนเปปไทด์ต้านจุลชีพครัสตินจากเซลล์เม็ดเลือดแดงของปูทะเล(Scylla paramamosain) โดยเทคนิค expressed sequence tag(EST) และ rapid amplification cDNA end (RACE) พบว่าประกอบด้วย ORF ขนาด 336 bp ที่สามารถถอดรหัสให้กรดอะมิโน 11 ตัว โดยมี signal peptide 21 ตัว เมื่อนำมาคำนวณมวลโมเลกุลของโปรตีนพบว่ามีขนาดประมาณ 10.27 kDa และมีค่า pI 8.54 จากการวิเคราะห์โดเมนของโปรตีน CrusSp พบว่าที่บริเวณปลาย C ประกอบด้วย whey acidic protein (WAP) domain จากการเปรียบเทียบลำดับกรดอะมิโนและการวิเคราะห์ความสัมพันธ์เชิงวิวัฒนาการพบว่ายีน CrusSp ที่แยกได้มีความคล้ายกับกลุ่มของยีนครัสตินโดยมีความสัมพันธ์ใกล้ชิดกับเปปไทด์ต้านจุลชีพครัสตินที่พบในปูCarcinus maenas จากการแยกและวิเคราะห์การจัดเรียงตัวของยีนพบว่ายีน CrusSp มีขนาด 999 bp ซึ่งประกอบด้วย 4 exon และ 3 intron โดยในบริเวณระหว่างรอยต่อระหว่าง exon และ intron เป็นไปตามGT/AG rule เมื่อตรวจสอบการแสดงออกของยีน CrusSp ในเนื้อเยื่อต่างๆของปูทะเลพบว่ายีน CrusSp มีการแสดงออกอย่างมากในเซลล์เม็ดเลือด เหงือก ลำไส้ และกล้ามเนื้อ แต่ไม่พบการแสดงออกในตับและก้านตา เมื่อนำยีน CrusSp มาศึกษาการแสดงออกใน Escherichia coli พบว่าสามารถเหนี่ยวนำให้มีการแสดงออกของโปรตีนรีคอมบิแนนท์ได้ เมื่อนำมาแยกบริสุทธิ์และตรวจสอบคุณสมบัติการต้านเชื้อจุลชีพพบว่าโปรตีน CrusSpมีฤทธิ์ในการต้านเชื้อแบคทีเรียแกรมบวกได้
