การพัฒนาวิธีอิมมูโนโครมาโทกราฟี สำหรับตรวจคัดกรองไมโครอัลบูมินในปัสสาวะ

Abstract

โรคไตจากเบาหวานเป็นโรคแทรกซ้อนที่พบบ่อยในผู้ป่วยเบาหวาน การตรวจไมโครอัลบูมินในปัสสาวะเป็นที่ยอมรับว่าเป็นตัวบ่งชี้ที่มีความไวสูงที่สามารถตรวจพบความผิดปกติของโรคไตจากเบาหวานได้ในระยะแรก ในงานวิจัยนี้ได้มีการพัฒนาวิธีอิมมูโนโครมาโทกราฟีในรูปแบบแถบทดสอบ สำหรับตรวจคัดกรองภาวะไมโครอัลบูมินในปัสสาวะ โดยนำโมโนโคลนัลแอนติบอดีที่จำเพาะต่ออัลบูมินในคนมาตรึงบนอนุภาคทองคำระดับนาโนเมตร และใช้เป็นส่วนคอนจูเกทในแถบทดสอบ ทำการตรึงซีรัมอัลบูมินของมนุษย์ (Human serum albumin, HSA) บนกระดาษไนโตรเซลลูโลสตรงตำแหน่งเส้นทดสอบ และตรึงแอนติบอดีทุติยภูมิต่อแอนติบอดีของหนู ตรงตำแหน่งเส้นควบคุม แถบตรวจนี้ใช้หลักการแบบแย่งจับ ระหว่างอัลบูมินในปัสสาวะที่ไหลมากับอัลบูมินที่ถูกตรึงบนตำแหน่งเส้นทดสอบในการจับกับแอนติบอดีที่ตรึงบนอนุภาคทองคำระดับนาโนเมตร ความเข้มข้นที่เหมาะสมที่ใช้ในการเชื่อมต่อระหว่างโมโนโคลนัลแอนติบอดีและอนุภาคทองระดับนาโนเมตรคือ 40 มิลลิกรัมต่อลิตรและ 100 มิลลิกรัมต่อลิตร ตามลำดับ ความเข้มข้นที่เหมาะสมสำหรับทั้ง HSA ที่ตรึงบริเวณเส้นทดสอบ และแอนติบอดีทุติยภูมิที่ตรึงตรงตำแหน่งเส้นควบคุม คือ 1 มิลลิกรัมต่อมิลลิลิตร แถบตรวจไมโครอัลบูมินในปัสสาวะที่พัฒนาได้สามารถวัดอัลบูมินในปัสสาวะและรายงานเป็นผลบวกได้เมื่ออัลบูมินมีความเข้มข้นมากกว่า 23.5 มิลลิกรัมต่อลิตร เมื่อเปรียบเทียบผลการตรวจวัดไมโครอัลบูมินในปัสสสาวะกับวิธีอิมมูโนเทอบิไดมิทรี โดยใช้ปัสสาวะจากผู้ป่วยเบาหวาน จำนวน 100 ราย (n=100) ผลการทดลองพบว่าแถบตรวจมีความไว 96 % ความจำเพาะ 100 % ค่าความถูกต้อง 99 % ยิ่งไปกว่านี้ ด้วยวิธีนี้มีค่าทำนายผลบวก 100% และค่าทำนายผลลบ 98%