วิธีการตรวจวัดดีเอ็นเอแบบกึ่งปริมาณจากเทคนิคลูปเมดิเอเตทไอโซเทอร์มอลแอมพลิฟิเคชัน (แลมป์) โดยอุปกรณ์ตรวจวิเคราะห์บนกระดาษแบบวัดระยะทาง

Abstract

อุปกรณ์ตรวจวิเคราะห์บนกระดาษแบบวัดระยะทาง (Distance-based paper analytical device; dPAD) ได้รับการพัฒนาขึ้น เพื่อตรวจวัดดีเอ็นเอตั้งต้นแบบกึ่งปริมาณจากปฏิกิริยาการเพิ่มจำนวนดีเอ็นเอของเชื้อ E.coli ในช่วงยีน malB ด้วยเทคนิค Loop mediated isothermal amplification (LAMP) โดยอาศัยการวัดระยะทางการเคลื่อนที่ของสีฟ้าที่เกิดจากการจับกันระหว่างสาร Polyethylenimine (PEI) ซึ่งเป็นสารพอลิเมอร์ประจุบวกที่ตรึงบนชุดตรวจกับสาร Hydroxynaphthol blue (HNB) ที่อยู่ในสารละลาย LAMP โดยสาร HNB นั้นเป็นตัวบ่งชี้โลหะไอออน (Metal ion indicator) ที่ใช้เป็นตัวติดตามการเปลี่ยนแปลงของแมกนีเซียมไอออน (Mg2+) ที่ถูกใช้ในกระบวนการเพิ่มจำนวนของดีเอ็นเอในปฏิกิริยา LAMP โดยชุดตรวจ dPAD ที่ได้พัฒนาขึ้นสร้างบนกระดาษกรอง Whatman เบอร์ 113 ด้วยเทคนิคพิมพ์ขี้ผึ้ง (Wax printing) สามารถตรวจวัดปฏิกิริยา LAMP แบบกึ่งปริมาณได้จากการอ่านระยะทางการเคลื่อนที่ได้ด้วยตาเปล่าและแปลผลการตรวจวัดเป็นปริมาณดีเอ็นเอตั้งต้นของเชื้อตัวอย่างในปฏิกิริยาได้ต่ำสุดเท่ากับ 4.14×103 สําเนาต่อไมโครลิตร โดยวิธีการอ่านผลด้วยตาเปล่าได้รับการตรวจสอบความถูกต้องจากการอ่านด้วยโปรแกรม ImageJ และพบว่าระยะทางการเคลื่อนที่ของสี HNB มีความสัมพันธ์กับปริมาณดีเอ็นเอตั้งต้นในปฏิกิริยา (r2) เท่ากับ 0.971 ดังนั้นชุดตรวจ dPADs ที่พัฒนาขึ้นจึงสามารถใช้เป็นวิธีทางเลือกใหม่สำหรับการตรวจวัดปฏิกิริยา LAMP แบบกึ่งปริมาณได้ อีกทั้งยังมีประโยชน์สำหรับการใช้งานในประเทศกำลังพัฒนา เนื่องจากชุดตรวจสร้างขึ้นได้ง่าย ราคาถูก ขั้นตอนการใช้งานไม่ยุ่งยาก และใช้ระยะเวลาในการตรวจวัดภายใน 5 นาทีเท่านั้น