Abstract:
โรคมะเร็งปากมดลูกเป็นโรคมะเร็งที่พบมากเป็นอันดับสองในผู้หญิงทั่วโลก โดยเฉพาะในประเทศกำลังพัฒนา ซึ่งรวมประเทศไทยด้วย มีการศึกษาพบภาวะ global DNA hypomethylation ในเซลล์มะเร็งชนิดต่างๆ รวมถึงมะเร็งปากมดลูกด้วย การศึกษานี้จึงสนใจพัฒนาวิธี Enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) ในการตรวจ global DNA methylation เพื่อตรวจกรองมะเร็งปากมดลูกซึ่งวิธี ELISA เหมาะสมกับประเทศกำลังพัฒนา วิธีดำเนินการวิจัย การศึกษานี้พัฒนาวิธี ELISA ในการตรวจ global DNA methylation พร้อมเปรียบเทียบผลกับวิธี bisulfite LINE1 pyrosequencing โดยใช้ตัวอย่างดีเอ็นเอที่สกัดจากเซลล์ปากมดลูกที่มีความผิดปกติระดับต่างๆ ผลการวิจัย โดยวิธี ELISA วัดค่าการดูดกลืนแสงที่ความยาวคลื่น 405 nm ณ เวลา 40 นาที พบค่า global DNA methylation ในเซลล์มะเร็งชนิดต่างๆได้ค่าร้อยละดังนี้ Caski คือ 3.72 SiHa คือ 1.74 HeLa คือ 2.42 ME180 คือ 4.79 MS751 คือ 5.09 และ C33A คือ 1.47 และจากเม็ดเลือดขาวจากคนปกติได้ค่าคือ 8.20 ผลการตรวจ LINE1 methylation โดยวิธี pyrosequencing ได้ค่าดังนี้ Caski ร้อยละ 45 SiHa ร้อยละ 35 และเม็ดเลือดขาวจากคนปกติได้ค่าคือ ร้อยละ 62 สำหรับผลตรวจ global DNA methylation ในตัวอย่างเซลล์ปากมดลูก 161 ตัวอย่าง โดยวิธี LINE1 pyrosequencing ได้ค่าดังนี้ Normal ร้อยละ 55.6 cervical intraepithelial lesion 1 (CIN1) ร้อยละ 56.8 CIN2-3 ร้อยละ 57.3 และมะเร็งปากมดลูกร้อยละ 48.8 พบว่าค่าเฉลี่ยของมะเร็งมีความแตกต่างกับระดับอื่นอย่างมีนัยสำคัญทางสถิติ (p<0.05) ผลตรวจโดยวิธี ELISA ในตัวอย่าง 100 ตัวอย่าง มีค่าดังนี้ Normal ร้อยละ 4.50 CIN1 ร้อยละ 3.83 CIN2-3 ร้อยละ 2.83 และมะเร็งปากมดลูกร้อยละ 3.03 พบว่าค่าเฉลี่ยของมะเร็งมีความแตกต่างกับระดับอื่นอย่างมีนัยสำคัญทางสถิติ (p<0.05) วิจารณ์ผลการวิจัย พบว่าในเซลล์มะเร็งมีภาวะ global DNA hypomethylation เมื่อเปรียบเทียบกับเซลล์ปกติ แต่ยังพบปัญหาการจับของดีเอ็นเอบนพื้นผิวสไลด์ในการทำ ELISA ทำให้ได้ค่าร้อยละของการเกิด global DNA methylation โดยวิธี ELISA ในระดับต่ำมากเมื่อเทียบกับวิธี LINE1 pyrosequencing จึงควรทำการพัฒนาเทคนิค ELISA เพิ่มเติมเพื่อให้ผลการวิจัยที่น่าเชื่อถือ
