การหาปริมาณไมโคทอกซินในข้าวกล้องโดยการเตรียมตัวอย่างด้วยการสกัดแคชเชอร์สและไฮเพอร์เฟอร์แมนซ์ลิควิดโครมาโทกราฟี

Abstract

ในงานวิจัยนี้ได้พัฒนาวิธีการวิเคราะห์อะฟลาทอกซินบี1, บี2, จี1และจี2 ในตัวอย่างข้าว กล้องด้วยไฮเพอร์ฟอร์แมนซ์ลิควิดโครมาโทกราฟี(HPLC) และการเตรียมตัวอย่างด้วยแคชเชอร์ สพบว่าเฟสเคลื่อนที่แบบไอโซเครติก เมทานอล: น้ำ อัตราส่วน 45:55 ให้ค่าการแยกสมบูรณ์ที่ฐาน พีกของสารทั้ง 4 ชนิด โดยใช้ภาวะของเครื่อง HPLC ต่อไปนี้ (คอลัมน์ชนิด C-18 LiChrosper® ขนาด 250 mmx4 mm อัตราการไหล 0.7 mL/min) ขีดจำกัดของการตรวจวัดและขีดจำกัดของ ปริมาณวิเคราะห์(LOQ) ด้วยเครื่องมืออยู่ในช่วง 0.03-0.05 และ 0.09-0.17μg/mL ความแม่นและ ความเที่ยงของการวิเคราะห์ด้วยHPLC อยู่ในช่วงที่ยอมรับได้ด้วยค่าความแม่น 87-113 และค่าส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐานสัมพันธ์ (RSD) ≤8% (ทิ่ 5 μg/mL) ≤10% (ที่ 1 μg/mL) และ ≤ 13%(ที่ LOQ)ซึ่งอยู่ในร้อยละการกลับคืนตาม AOAC 80-110 (0.1-10 μg/mL) และRSD ≤7.3% (ที่5 μg/mL)≤11% (ที่ 1 μg/mL) และ ≤15%(ที่ LOQ)ในการสกัดแคชเชอร์ส ได้สกัดข้าวกล้อง (2 g)ที่ เติมอะฟลาทอกซิน (1 μg/g)โดยใช้อะซิโตไนไตรล์(5 mL) ที่มีNaCl (1 g) และ MgSO4(4 g) และ จากนั้นกำจัดสารรบกวนด้วยการสกัดวัฏภาคของแข็งแบบดีสเพอร์ซีฟโดยตัวดูดซับ 3 ชนิด (50 mg) เช่นPSA, C-18 และ PSA:C-18ประเมินโดยใช้ ANOVA single factor ที่ระดับความเชื่อมั่น 95% พบว่าร้อยละการกลับคืนแตกต่างกันอย่างมีไม่นัยสำคัญที่ใช้ตัวดูดซับทั้ง 3 ชนิดนี้ นอกจากนี้ความแม่นและความเที่ยงของการสกัดแคชเชอร์ส (อะฟลาทอกซินที่เติมลงในข้าวกล้อง 1 μg/g) อยู่ในช่วงที่ยอมรับได้ของการกลับคืน 82-101%และRSD ≤11%(ยกเว้นร้อยละการ กลับคืน76% และ RSD ≤15% สำหรับจี2 ที่ใช้ตัวดูดซับ PSA:C-18) ซึ่งอยู่ในช่วงที่ยอมรับได้ของ AOAC สำหรับการกลับคืน 80-110%และ RSD ≤ 11%