การวิเคราะห์ความหลากหลายทางพันธุกรรมของเชื้อ Trypanosoma evansi ด้วยวิธีปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอเรส

ศุภรินทร์ จิรสุขประเสริฐ

dc.contributor.advisor	นารีรัตน์ วิเศษกุล
dc.contributor.advisor	โกสุม จันทร์ศิริ
dc.contributor.author	ศุภรินทร์ จิรสุขประเสริฐ
dc.contributor.other	จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย. คณะสัตวแพทยศาสตร์
dc.date.accessioned	2020-06-19T02:38:18Z
dc.date.available	2020-06-19T02:38:18Z
dc.date.issued	2548
dc.identifier.isbn	9741760396
dc.identifier.uri	http://cuir.car.chula.ac.th/handle/123456789/66511
dc.description	วิทยานิพนธ์ (วท.ม.)--จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย, 2548
dc.description.abstract	โรคเซอราเกิดจากเชื้อ Typanosoma evansi ซึ่งเป็นโปรโตซัวที่เป็นปรสิตในสัตว์เลี้ยงลูกด้วยน้ำนมหลายชนิด ก่อให้เกิดอาการทางคลินิกที่หลากหลายตั้งแต่ การติดเชื้อแบบเรื้อรังในสุนัขหรือสุกร จนถึงการติดเชื้อแบบเฉียบพลันรุนแรงในม้า ในการศึกษาครั้งนี้ทำการศึกษาเชื้อ T. evansi ที่พบในประเทศไทย 5 isolates โดยใช้วิธีทางอณูชีววิทยาด้วยกัน 3 ทดลอง โดยมีวัตถุประสงค์เพื่อพัฒนาวิธีการในการจำแนกความหลากหลายภายในชนิดของเชื้อ T. evansi ด้วยสารพันธุกรรม ในขั้นตอนแรกคือการหาลำดับเบสขนาด 511 คู่เบส ในส่วนของ ITS1 และนำมาวิเคราะห์ phylogenetic เปรียบเทียบกับข้อมูลลำดับดับเบสของเชื้อ T. evansi ใน GenBank ทำให้สามารถแยกกลุ่มของเชื้อที่ทำการศึกษาออกได้เป็น 5 กลุ่ม ต่อมาเป็นการพัฒนาวิธี Amplification Fragment Length Polymorphism (AFLP) โดยใช้ primer 122-2/122-3 พบว่าสามารถแสดงถึงความหลากหลายทางพันธุกรรมในรูปแบบของแถบ DNA ที่เกิดขึ้นจากการวิเคราะห์ผลด้วย agarose gel electrophoresis และสุดท้าย ได้นำเอาเชื้อ T. evansi VPH03 ซึ่งเป็นเชื้อจากม้า มาทำให้บริสุทธิ์ขึ้นโดยการผ่านเชื้อสู่หนูทดลอง 3 ครั้ง นำเชื้อที่ผ่านการทำให้บริสุทธิ์ขึ้นมาทำการวิเคราะห์หาลำดับเบสในส่วนของ ITS1 พบว่า VPh03 ประกอบด้วย genotype อย่างน้อย 4 genotypes คือ f, g, j และ k ในขณะที่เมื่อนำมาวิเคราะห์ AFLP พบว่ามี AFLP fingerprint 2 รูปแบบ จากผลการทดลองยับพบว่าไม่มีความสัมพันธ์ระหว่างลำดับเบสของ ITS1 และรูปแบบของ AFLP สรุปได้ว่า VPH03 เป็นเชื้อที่มีการผสมกันของเชื้ออย่างน้อย 4 ประชากรเชื้อ และ genotype f เป็นประชากรเชื้อสามัญของเชื้อที่พบในประเทศไทย
dc.description.abstractalternative	Surra in animals is a result of infection by the protozoan Trypanosoma evansi, a haemoflagellated parasite. The disease shows considerable diversity of clinical signs from a mild chronic infection in dogs or swine to the fatally acute disease in horses. In this study, we genetically characterized four isolates and one cloned T. evansi in Thailand by three molecular approaches. Aims are to develop the method of genetic identification of T. evansi using VPh03 which was isolated from the infected horse. Firstly, the 511 bp sequences of the ITS1 region have been analyzed phylogenetically compared to the T. evansi aequences retrieved from Gen Bank database. Results showed that the Thai isolates were clustered into a group of a least five genotypes. Secondly, the method of Amplification Fragment Length Polymorphisms (AFLP) was developed. Using primer 122-2/122 in the AFLP reaction was able to detect the genetic variations showing a banding pattern on the agarose gel electrophoresis. Lastly, T. evansi parasites from VPh03 was cloned and subsequently passed onto mice up to three passages. By all means, cloned VPh03 comprised at least four genotypes, f, g, j and k, analyzed by the ITS1 region. However, there are only two AFLP fingerprint patterns detected. By using all methods and although there were no correlations between ITS1 sequences and the AFLP pattern, our conclusion is that VPh03 is a mixture of at least four T. evansi populations. Moreover, genotype f is the major population among Thai isolates.
dc.language.iso	th
dc.publisher	จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย
dc.rights	จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย
dc.subject	ทริปาโนโซมิเอซิสในสัตว์
dc.subject	โปรโตซัววิทยาทางสัตวแพทยศาสตร์
dc.subject	ปฏิกิริยาลูกโซ่โพลิเมอเรส
dc.subject	Trypanosomiasis in animals
dc.subject	Veterinary protozoology
dc.subject	Polymerase chain reaction
dc.subject	Trypanosoma evansi -- Thailand
dc.title	การวิเคราะห์ความหลากหลายทางพันธุกรรมของเชื้อ Trypanosoma evansi ด้วยวิธีปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอเรส
dc.title.alternative	Analysis of genetic variations of Trypanosoma evansi by polymerase chain reaction
dc.type	Thesis
dc.degree.name	วิทยาศาสตรมหาบัณฑิต
dc.degree.level	ปริญญาโท
dc.degree.discipline	พยาธิชีววิทยาทางสัตวแพทย์
dc.degree.grantor	จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย
dc.email.advisor	Nareerat.V@Chula.ac.th
dc.email.advisor	ไม่มีข้อมูล