Abstract:
งานวิจัยนี้มีจุดประสงค์ที่จะผลิต lambda gt 11 DNA จากเชื้อ E. coli BNN 97 โดยการเหนี่ยวนำให้เชื้อเกิด lysis ที่อุณหภูมิ 45 C จากนั้นนำ Bacteriophage lambda gt 11 มาบุกรุกเซลล์ให้อาศัย E. coli Y 1088 จะสามารถขยายจำนวน Bacteriophage ให้มากขึ้นก่อนที่จะทำการแยก lambda gt 11 DNA แบบเสกลเล็ก (Requena 1993) และแบบขยายส่วน (Maniatis 1982) ปริมาณ lambda gt 11 DNA ที่แยกได้จากแต่ละวิธีขึ้นอยู่กับจำนวน pfu ของ lambda gt 11 ที่ใช้ในการบุกรุกเซลล์ให้อาศัย ผลการทดลองพบว่า เมื่อใช้ lambda gt 11 จำนวน 5 x 10[superscript 5] pfu บุกรุกเซลล์ให้อาศัย จะสามารถแยก lambda gt 11 DNA แบบเสกลเล็กได้ทั้งหมดเท่ากับ 7.93 มิลลิกรัม และเมื่อใช้ lambda gt 11 จำนวน 10[superscript 4] pfu บุกรุกเซลล์ให้อาศัย จะสามารถแยก lambda gt 11 DNA แบบขยายส่วนได้ทั้งหมดเท่ากับ 0.25 มิลลิกรัม อย่างไรก็ตาม lambda gt 11 DNA ที่เตรียมแบบเสกลเล็กยังปนเปื้อนด้วย chromosomal DNA ของเซลล์ให้อาศัย นอกจากนี้งานวิจัยยังมีความประสงค์ที่จะผลิต In vitro packaging mixes จากเชื้อ E. coli BHB 2688 และ E. coli BHB 2690 ตามวิธีของ Maniatis (1982) เพื่อนำมาเตรียม Freeze thaw lysate และ Sonic extract ตามลำดับ เมื่อนำ In vitro packaging mixes มาทดสอบประสิทธิภาพของการ packaging กับ lambda gt 11 DNA ที่แยกได้ ผลการทดลองพบว่าได้จำนวน Bacteriophage 1.48 x 10[superscript 11] pfu/microgram DNA
