Eepression and characterization of a recombinant novel snake venom metalloproteinase from green pit viper (Cryptelytrop albolabris)

Panchalee Jangprasert

dc.contributor.advisor	Ponlapat Rojnuckarin
dc.contributor.author	Panchalee Jangprasert
dc.contributor.other	Chulalongkorn University. Faculty of Medicine
dc.date.accessioned	2020-09-18T09:44:48Z
dc.date.available	2020-09-18T09:44:48Z
dc.date.issued	2009
dc.identifier.uri	http://cuir.car.chula.ac.th/handle/123456789/68019
dc.description	Thesis (M.Sc.)--Chulalongkorn University, 2009
dc.description.abstract	Snake venom metaloproteases (SVMPs) may degrade extracellular matrix and/or clotting factors, as well as inhibit integrin and platelet functions, studying them not only gives US deeper insights in pathogenesis of snakebites, but also potentially yields novel antiplatelet agents. A clone of novel RGD-containing, P-ll type, snake venom metalloproteinase was isolated from the green pit viper, C. albolabris, venom gland cDNA library. Sequence analysis revealed that it belonged to P-llb subclass of SVMP and 81% identical to Jerdonitin from Trimeresurus jerdonii. They contained 2 conserved cysteines forming a disulfide bond, which held metalloproteinase and disintegrin together in mature proteins. The N-terminally histidine-tagged construct of metalloproteinase and disintegrin domains was inserted into the pPICZ α A vector and expressed in Pichia pastoris. The recombinant protein was approximately 32kD on Western blot probed with anti-polyhistidine antibody. The recombinant SVMP dose dependently inhibited platelet aggregation induced by collagen with the IC₅₀ of 5.6 µM. . However, there was no effect on ADP-induced platelet aggregation. Therefore, the inhibition mechanism should be through blocking of collagen receptor(s). This recombinant protein has a potential to be a novel anti-platelet agent.
dc.description.abstractalternative	โปรตีนเมตาโลโปรตีเนสจากพิษงูมีฤทธิ์ตัดย่อยเนื้อเยื่อรอบเซลล์ ปัจจัยการแข็งตัวของ เลือด และ ยับยั้งการทำงานเกล็ดเลือด การศึกษาโปรตีนนี้ไม่เพียงแต่ให้ความรู้เกี่ยวกับพยาธิ กำเนิดของงูกัด แต่ยังอาจทำให้ได้ยาต้านเกล็ดเลือดชนิดใหม่ เราได้โคลนของโปรตีนเมตาโลโปรตีเนสชนิด'ใหม่ซึ่งมีลำดับเบส RGD ที่แยกได้จากห้องสมุด cDNA ของต่อมพิษของของงูเขียวหางไหม้ท้องเหลืองคริปเทไลทรอปส์ อัลโบลาบรีส การวิเคราะห์ลำดับเบสพบว่าโปรตีนจัดอยู่ในกลุ่มย่อย P-llb ของโปรตีนเมตาโลโปรตีเนสจากพิษงูและมีความเหมือนกับ Jerdonitin จากงู Trimeresurus jerdonii ร้อยละ 81 โดยมีส่วนของซิสเทอีนที่เหมือนกันซึ่งเกิดไดซัลไฟด์บอนด์จับระหว่างเมตาโลโปรตีเนสและดิสอินทริกรินเข้าด้วยกัน cDNA ซึ่งติดฉลากด้วยฮิสทิดีนที่ปลายด้านอมิโนประกอบด้วยของโดเมนส่วนเมตาโลโปรตีเนสและดิลอินทริกรินถูกนำมาใส่ในพาหะ pPICZαA และแสดงออกในยีสต์ Pichia pastoris โปรตีนที่แสดงออกมีขนาดประมาณ 32 กิโลดาลตัน จากการทำ Western blot ที่จับด้วยแอนติบอดีต่อ polyhistidine โปรตีนลูกผสมมีความสามารถในการยับยั้งการเกาะกลุ่มของเกล็ดเลือดจากการกระตุ้นด้วยคอลลาเจนโดยขึ้นกับความเข้มข้น ความเข้มข้นที่ยับยั้งการเกาะกลุ่มของเกล็ดเลือดได้ร้อยละ 50 (IC₅₀) คือ 5.6 ไมโครลิตร แต่ไม่สามารถยับยั้งการเกาะกลุ่มของเกล็ดเลือดที่กระตุ้นด้วย เอดีพี ดังนั้นกลไกการยับยั้งอาจเกิดจากการขัดขวางการเข้าจับที่ตัวรับของคอลลาเจน โปรตีนนี้มีศักยภาพที่จะนำไปใช้เป็นสารต้านการแข็งตัวของเกร็ดเลือดชนิดใหม่ได้
dc.language.iso	en
dc.publisher	Chulalongkorn University
dc.rights	Chulalongkorn University
dc.subject	Snake Venoms
dc.subject	พิษงู
dc.subject	งูพิษ
dc.subject	งูเขียวหางไหม้ท้องเหลือง
dc.title	Eepression and characterization of a recombinant novel snake venom metalloproteinase from green pit viper (Cryptelytrop albolabris)
dc.title.alternative	การแสดงออกและคุณสมบัติของโปรตีนลูกผสมเมตาโลโปรตีนตีเนสชนิดใหม่จากพิษงูเขียวหางไหม้ท้องเหลือง (คริปเทไลทรอปส์ อัลโบบาลรัส)
dc.type	Thesis
dc.degree.name	Master of Science
dc.degree.level	Master's Degree
dc.degree.discipline	Medical Science
dc.degree.grantor	Chulalongkorn University