Abstract:
ในปัจจุบันมีเทคโนโลยีที่สามารถควบคุมการทำงานของยีน โดยการกดการทำงานของการสร้าง RNA ได้ โปรตีนที่สำคัญที่น่าจะนำมาใช้ได้คือโปรตีน Argonaute1 เพราะสามารถสร้างโครมาตินให้จับตัวกันอย่างหนาแน่นในบริเวณที่โปรตีน Argonaute1 ไปจับ ซึ่งการศึกษานี้ทดสอบการใช้โปรตีน Argonaute1 เพื่อยับยั้งยีนมะเร็ง เพื่อหวังผลพัฒนาวิธีการรักษาในอนาคต ยีน E7 เป็นยีนมะเร็งที่สำคัญ ที่สร้างจาก E7 HPV ในมะเร็งปากมดลูก และการยับยั้งไม่ให้ E7 สามารถสร้าง RNA ซึ่งเป็น oncogene ที่ทำให้เซลล์มะเร็งแบ่งตัวจากระยะ G1 เข้าสู่ระยะ S phase ได้นั้น น่าจะทำให้เซลล์มะเร็งมีการหยุดการแบ่งตัวในวัฏจักรเซลล์ (Cell cycle) ในการศึกษานี้จึงสนใจศึกษาในยีน E7 ซึ่งเป็นยีนที่เกี่ยวข้องกับการเกิดโรคมะเร็งปากมดลูก ที่มีคุณสมบัติเป็น oncogene และ encode ได้ oncoprotein ออกมา วัตถุประสงค์ของการศึกษานี้เพื่อพิสูจน์ว่า CPPs-AGO1+E7sgRNA complex สามารถส่งผลกระทบต่อการแสดงออกของยีน ทำให้ยีนเป้าหมายเกิดการลดการแสดงออกของยีนได้ (down-regulated gene) และสามารถลดความเป็นมะเร็งลงได้ โดยการออกแบบ Construction โปรตีน Argonaute1 จับกับ E7 single guide strand RNA (E7sgRNA) ได้เป็น complex และนำเข้าสู่เซลล์มะเร็งปากมดลูก (cell line) ได้แก่ HeLa และ C-33 A จากนั้นนำมาสกัด RNA และทำการสังเคราะห์ cDNA เพื่อนำไปตรวจสอบการแสดงออกของยีน E7 และนำไปวัดตรวจวัดค่า metabolic activity ด้วยเทคนิค MTT assay พบว่า CPPs-AGO1+E7sgRNA สามารถยับยั้งการทำงานของยีน E7 ได้ การแสดงออกของยีนลดลงอย่างมีนัยสำคัญในเซลล์มะเร็ง HeLa แต่ไม่พบการเปลี่ยนแปลงของระดับการแสดงออกของยีน E7 ในเซลล์ C-33 A และเมื่อนำมาตรวจสอบการเจริญของเซลล์ (Cell proliferation) โดยการวัดค่า metabolic activity ด้วยเทคนิค MTT assay พบว่า CPPs-AGO1+E7sgRNA นั้นมีความสามารถทำให้การเจริญของเซลล์มะเร็งลดลงอย่างมีนัยสำคัญในเซลล์ HeLa แต่ไม่พบการเจริญของเซลล์ลดลงในเซลล์ C-33 A จากการศึกษานี้จึงสรุปได้ว่าโปรตีน Argonaute1 มีสามารถในการยับยั้งการทำงานของยีนส่งผลให้การแสดงออกของยีนลดลง ซึ่งเป็นผลมาจากการทำงานของ E7sgRNA ที่นำพาโปรตีน AGO1 ไปยังลำดับเบสเป้าหมายได้อย่างมีประสิทธิภาพ มีผลทำให้ยีนเกิดการยับยั้งการทำงานด้วยกระบวนการ Histone modification ซึ่งทำให้โครมาตินจับตัวกันอย่างหนาแน่น และยังส่งผลต่อการเจริญของเซลล์มะเร็งปากมดลูก (HeLa cell line) ทำให้การเจริญของเซลล์มะเร็งปากมดลูกลดลงอย่างมีนัยสำคัญได้เมื่อเปรียบเทียบระหว่างกลุ่ม CPPs-AGO1+E7sgRNA กับกลุ่ม CPPs-AGO1+Scramble
