Abstract:
Bacillus subtilis สายพันธุ์กลาย UUNN-1 สามารถผลิตแอลคาไลน์โปรติเอสได้ในปริมาณสูงในถังหมักขนาด 5 ลิตร แบบไม่ต่อเนื่อง โดยใช้สูตรอาหารที่ ปริมาณไนโตรเจนจากสารสกัดจากกากถั่วเหลืองผสมกากเมล็ดดอกทานตะวัน เท่ากับ 0.4%(w/v), KH[subscript 2]PO[subscript 4] 0.1%(w/v), MgSO[subscript 4].7H[subscript 2]O 0.05%(w/v), CaCl[subscript 2].2H[subscript 2]O 0.001%(w/v) ค่าความเป็นกรด-ด่างเท่ากับ 7.0 ปริมาณเชื้อเริ่มต้นเท่ากับ 1.0%(v/v) ควบคุมอุณหภูมิที่ 37 องศาเซลเซียส อัตราการกวน 250 รอบต่อนาที อัตราการเติมอากาศ เท่ากับ 1.0 vvm ในปริมาณทั้งสิ้น 3.5 ลิตร ทำการผลิตได้ 1,579 ยูนิตต่อกรัมเซลล์แห้งรวมใช้ระยะเวลาในการหมัก 36 ชั่วโมง ทำการแยกให้บริสุทธิ์โดยการตกตะกอนด้วยแอมโมเนียมซัลเฟต 40-60 เปอร์เซ็นต์อิ่มตัว กำจัดเกลือโดยวิธี dialysis แล้วทำโครมาโตกราฟีแบบคอลัมน์ด้วย ดีอีเอ อี-เซลลูโลส และ เซฟาเด็กซ จี-100 ตามลำดับ ได้แอลคาไลน์โปรติเอสมีความบริสุทธ์เพิ่มขึ้น 165 เท่า และค่าแอคติวิตีจำเพาะเท่ากับ 1,688 ยูนิตต่อมิลลิกรัมโปรตีน ซึ่งเอนไซม์นี้มีน้ำหนักโมเลกุลประมาณ 27,000 ดาลตัน จากวิธีเจลโครมาโตรกราฟี เร่งปฏิกิริยาการย่อยสลายโปรตีนที่ ช่วงอุณหภูมิ 30-65 องศาเซลเซียส และช่วงค่าความเป็นกรด-ด่างเท่ากับ 8.5-10 และเหมาะสมที่ 45 องศาเซลเซียส ค่าความเป็นกรด-ด่างเท่ากับ 10.5 มีค่า K[subscript m] ต่อเคซีนเท่ากับ 0.101 mM และ V[subscript max] ต่อเคซีนเท่ากับ 0.0087 mM/min และถูกยับยั้งโดยสาร phenylmethylsulfonyl fluoride (PMSF)
