Please use this identifier to cite or link to this item: http://cuir.car.chula.ac.th/handle/123456789/3384
Title: การหาภาวะที่เหมาะสมในการผลิตนิวทรัลโปรติเอสทนร้อนจาก Bacillus cereus และลักษณะสมบัติของเอนไซม์ที่บริสุทธิ์บางส่วน
Other Titles: Optimization for the production of thermoresistant neutral protease from Bacillus cereus and characterization of partially purified enzyme
Authors: อภิรดี อุดมสิน, 2517-
Advisors: นภา ศิวรังสรรค์
Other author: จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย. คณะวิทยาศาสตร์
Advisor's Email: Napa.S@chula.ac.th
Subjects: เอนไซม์--การผลิต
โปรติเอส
แบคทีเรีย
Issue Date: 2546
Publisher: จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย
Abstract: Bacillus cereus เป็นแบคทีเรียที่ผลิตโปรติเอสทนร้อน ที่แยกได้จากดินบริเวณบ่อน้ำร้อนในประเทศไทย แบคทีเรียที่ถูกคัดเลือกชนิดนี้ถูกจำแนกสายพันธุ์ โดยใช้ลักษณะทางชีวเคมีและยืนยันผลด้วยวิธี 16S rRNA gene จากการทดลองพบว่า ภาวะที่ดีที่สุดคือการใช้ Raja's medium ซึ่งมีสูตรอาหารดังนี้ CaCl2.2H2O 0.1 กรัม, K2HPO4 0.06 กรัม MgSO4. 7H2O 0.05 กรัม, NaCl 0.045 กรัม และ Peptone 0.5 กรัม %(w/v) ที่อุณหภูมิ 37 ํC, pH 7.0, ปริมาณเชื้อเริ่มต้นที่เหมาะสมคือ 0.5% (v/v) ซึ่งมีส่วนประกอบในอาหารคือ 0 กรัม %glucose (w/v), 0.5 กรัม %peptone (w/v) ภายใต้การเลี้ยงในขวดเขย่าขนาด 1 ลิตรซึ่งมีอาหารเลี้ยงเชื้อปริมาตร 300 มล. โดยใช้ความเร็วรอบในการเขย่าที่ 200 รอบต่อนาที และภาวะที่ดีที่สุดในการหาแอคติวิตีของโปรติเอส โดยใช้ azocasein คือที่อุณหภูมิ 55 ํC, pH 7.0 ภายหลังการเลี้ยงเชื้อเป็นเวลา 48 ชั่วโมง สามารถผลิตเอนไซม์ซึ่งมีค่าแอคติวิตีสูงที่สุดเท่ากับ 5.69 หน่วยต่อมก. โปรตีน จากการหาน้ำหนักโมเลกุลของเอนไซม์โดยวิธีเซฟาเดกซ์ จี-75 คอลัมน์โครมาโตรกราฟี พบว่ามีน้ำหนักโมเลกุล 34,700 ดาลตัน ส่วนการหาหน่วยย่อยของเอนไซม์ด้วยวิธี Substrate-Containing SDS Zymogram gel พบว่ามีน้ำหนักโมเลกุล 44,700 ดาลตัน แคลเซียมอิออนสามารถเร่งการทำงานของ crude enzyme ได้และสารที่ยับยั้งการทำงานของเอนไซม์คือ EDTA นิวทรัลโปรติเอสที่ผลิตจาก B. cereus สามารถย่อยสับสเตรททั้ง casein หรือ azocasein ได้ดีกว่านิวทรัล โปรติเอสที่ผลิตจาก B.subtilis TISTR 25
Other Abstract: Bacillus cereus was isolated as a mesophilic bacteria which produced thermoresistant protease among 63 soil samples. The isolated bacteria was selected and identified by using biochemical characterization. And the test was confirmed with 16S rRNA gene. It was found that the best conditions were used Raja's medium (CaCl2.2H2O 0.1 g, K2HPO4 0.06 g, MgSO4.7H2O 0.05 g, NaCl 0.045 g, peptone 0.5 g% (w/v)) at 370 ํC, pH 7.0, 0.5% (v/v) initial inoculum size, 0% (w/v) glucose in shaking flask culture 1,000 ml and were shaked with the speed of 200 rpm. The protease was exhibited maximum activity towards azocasein at 550 ํC, pH 7.0 and the enzyme production was reached its maximum level of 5.69 U/mg protein after 48 hours. The protease had an apparent molecular weight of 34,700 Dalton by Sephadex G-75 gel - filtration chromatography. And the protease had molecular weight of 44,700 Dalton by Substrate-Containing SDS Zymogram gel. The activity, crude enzyme, was considerably increased by addition of Ca2+. Enzyme activity was inhibited by EDTA. The data clearly indicated that protease from Bacillus cereus was likely neutral protease. Neutral protease from B.cereus that could hydrolyse substrate , casein or azocasein, better than the protease from B.subtilis TISTR25
Description: วิทยานิพนธ์ (วท.ม.)--จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย, 2546
Degree Name: วิทยาศาสตรมหาบัณฑิต
Degree Level: ปริญญาโท
Degree Discipline: เทคโนโลยีชีวภาพ
URI: http://cuir.car.chula.ac.th/handle/123456789/3384
ISBN: 9741737327
Type: Thesis
Appears in Collections:Sci - Theses

Files in This Item:
File Description SizeFormat 
Apiradee.pdf2.13 MBAdobe PDFView/Open


Items in DSpace are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.