Expression of human glucocerebrosidase gene in transgenic green algae Dunaliella salina Teod.

Abstract

Dunaliella salina เป็นสาหร่ายสีเขียวที่เป็นแหล่งผลิตเบตาแคโรทีน สามารถเจริญเติบโตได้ในสภาวะที่มีเกลือสูงและมีศักยภาพในการผลิตเชิงอุตสาหกรรม การทดลองหาสภาวะเหมาะสมในการเพาะเลี้ยงสาหร่ายด้วยสูตรอาหาร JR ที่ดัดแปลง พบว่า ความเข้มข้นของอาหารที่ 0.25 เท่า และ pH 8.5 ทำให้สาหร่ายมีอัตราการเจริญเติบโตดีที่สุด เมื่อเปรียบเทียบที่ความเข้มข้นเดียวกันกับสูตร J/1 ซึ่งเป็นสูตรแนะนำ พบว่ามีการเจริญที่สูงกว่าจึงสามารถใช้สูตรอาหารนี้เป็นระบบเลี้ยงทดแทนได้ การถ่ายยีนโดยใช้ยีนต้านทานยาปราบวัชพืชไบอะลาฟอส (bar) เป็นมาร์คเกอร์ สาหร่ายดังกล่าวเมื่อนำมาถ่ายยีนร่วมกับ PEG ความเข้มข้นต่าง ๆ 6 ระดับคือ 0% 0.02% 0.04% 0.06% 0.08% และ 0.1% โดยมวลต่อปริมาตร พบว่าการใช้ PEG พบว่าการใช้ PEG ความเข้มข้น 0.08% ช่วยให้สาหร่ายต้านทานยาปราบวัชพืชไบอะลาฟอสมากที่สุด การทดสอบทางชีววิทยาโมเลกุลในระดับดีเอ็นเอโดยวิธี PCR และการแสดงออกในระดับอาร์เอ็นเอโดยวิธี RT-PCR พบแถบดีเอ็นเอเป้าหมายตรงกับการทดลองชุดควบคุม เมื่อนำยีนกลูโคซีรโบรซิเดสซึ่งเป็นยีนสร้างโปรตีนทางการแพทย์จากมนุษย์มาทดลองถ่ายยีนเข้าสู่สาหร่ายโดยเชื่อมต่อยีนเข้ากับพลาสมิด pBicBar และถ่ายยีนตามสภาวะดังกล่าวพบการต้านทานยาปราบวัชพืชของสาหร่ายภายหลังการเพาะเลี้ยง 1 เดือน โดยสาหร่ายมีการเจริญในอัตร 5 x 10 4 เซลล์ต่อมิลลิลิต และตรวจวัดทางชีววิทยาโมเลกุลด้วยวิธี PCR และ RT-PCR กับยีนกลูโคซีรีโบรซิเดส พบว่าให้ผลบวกทั้ง 2 วิธีเป็นการยืนยันว่าได้ถ่ายยีนกลูโคซีรีโบรซิเดสของคนสำเร็จและมีการแสดงออกในระดับอาร์เอ็นเอ ผลการทดลองยืนยันความเป็นไปได้ในการใช้ความสามารถในการถ่ายยีนและแสดงออกของยีนสาหร่ายและเป็นรากฐานในการประยุกต์ในสอนาคต