การเปลี่ยนแปลงไมโครอาร์เอ็นเอของมนุษย์ในเซลล์ที่ติดเชื้อไวรัสตับอักเสบบีและได้รับยาเพ็คกิเลตอินเตอร์เฟอรอน แอลฟา ทู เอ

Abstract

อินเตอร์เฟอรอน (Interferons: IFNs) ถูกสร้างจากเซลล์ที่มีการติดเชื้อไวรัส เป็นส่วนหนึ่งของระบบภูมิคุ้มกันประเภท innate immune system ในปัจจุบันพบว่า IFNs นั่นเป็นยามาตราฐานที่ถูกนำมาใช้ทางการแพทย์เพื่อรักษาโรคติดเชื้อไวรัสตับอักเสบบี โดย IFNs จัดเป็นไซโตไคน์ที่มีการกระตุ้นการทำงานผ่านทางตัวรับที่มีความจำเพาะต่อตัวรับ IFNs (IFN-receptors: IFN-R ) ซึ่งจะไปกระตุ้นการส่งสัญญาณของ IFNs pathways และกระตุ้นยีนที่ตอบสนองต่อ IFNs (IFN-inducible genes) และโปรตีนที่มีความเกี่ยวข้อง รวมถึงไมโครอาร์เอ็นเอ (microRNAs: miRNAs) ในงานวิจัยนี้จึงต้องการที่จะศึกษาการเปลี่ยนแปลงการแสดงออกของ miRNAs ในเซลล์มะเร็งตับที่ได้รับพลาสมิดไวรัสตับอักเสบบีและได้รับยาเพ็คกิเลตอินเตอร์เฟอรอน แอลฟา ทู เอ ในงานวิจัยนี้ได้ศึกษาในเซลล์ Huh7 ที่ได้รับและไม่ได้รับพลาสมิดไวรัสตับอักเสบบีเป็นเวลา 6 ชั่วโมง จากนั้นบ่มเซลล์ด้วยยาเพ็คกิเลตอินเตอร์ เฟอรอน แอลฟา ทู เอ หรือในอาหารเลี้ยงเซลล์ที่ไม่มียาเพ็คกิเลตอินเตอร์ เฟอรอน แอลฟา ทู เอ หลังจาก 24 ชั่วโมงจะนำมาสกัดอาร์เอ็นเอสายสั้นๆและเตรียมตัวอย่างเพื่อนำไปวัดการแสดงออกของ miRNA ด้วยเทคนิค next-generation sequencing (NGS): MiSeq platform (Illumina) โดยระดับการแสดงออกของ miRNAs ที่สนใจศึกษาจะถูกวัดด้วยเทคนิค real-time PCR และวิเคราะห์ก่อนจะนำไปทำนายยีนเป้าหมายของ miRNAs ที่สนใจด้วยโปรแกรม miRTarbase และวิเคราะห์ระดับการเปลี่ยนแปลงการแสดงออกของ miRNAs โดยใช้วิธี delta delta Ct (2-ΔΔCt) ทำนาย จากผลการทดลองพบว่าในเซลล์ที่ได้รับพลาสมิดไวรัสตับอักเสบบีและได้รับยาเพ็คกิเลตอินเตอร์เฟอรอน แอลฟา ทู เอ มีระดับการแสดงออกของ miRNAs ที่เปลี่ยนแปลงไปทั้งหมด 11 miRNAs โดยมี 6 miRNAs ที่มีการแสดงออกลดลงสอดคล้องกันทั้งผลจากการทำ NGS และ real-time PCR ได้แก่ miR-128 miR-151 miR-185 miR-186 miR-425 และ miR-483 จากนั้นทำนายบทบาททางชีวภาพและภูมิคุ้มกันของยีนเป้าหมายที่อาจมีความเกี่ยวข้องกับการรักษาผู้ป่วยตับอักเสบบีเรื้อรัง งานวิจัยนี้จะทำให้เกิดความเข้าใจการเปลี่ยนแปลงระดับการแสดงออกของ miRNAs ในสภาวะที่มีความเกี่ยวข้องกับเชื้อไวรัสตับอักเสบบี และ IFNs ได้มากขึ้น