การทำให้บริสุทธิ์บางส่วนและลักษณะสมบัติของโปรติเอส จากป่านศรนารายณ์ Agave sisalana

สมบัติ คงวิทยา

Please use this identifier to cite or link to this item: https://cuir.car.chula.ac.th/handle/123456789/72545

Title:	การทำให้บริสุทธิ์บางส่วนและลักษณะสมบัติของโปรติเอส จากป่านศรนารายณ์ Agave sisalana
Other Titles:	Partial purification and characterization of protease from sisal Agave sisalana
Authors:	สมบัติ คงวิทยา
Advisors:	วินิจ ขำวิวรรธน์ นภา ศิวรังสรรค์
Other author:	จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย. บัณฑิตวิทยาลัย
Advisor's Email:	ไม่มีข้อมูล Napa.S@chula.ac.th
Subjects:	ป่านศรนารายณ์ พฤกษเคมี เอนไซม์โปรติเอส Botanical chemistry Proteolytic enzymes
Issue Date:	2541
Publisher:	จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย
Abstract:	เมื่อทำโปรติเอสจากป่านศรนารายณ์ Agave sisalana ให้บริสุทธิ์บางส่วนโดยการตกตะกอนด้วยแอมโมเนียมชัลเฟตที่ความเข้มข้นอิ่มตัว 25-80 เปอร์เช็นต์ แล้วนำไปทำโครมาโตกราฟีแบบคอลัมน์ด้วย Sephadex G-100 และ DEAE-cellulose พบว่านีแอคติวิตีจำเพาะ 4.32 ยูนิตต่อมิลลิกรัมโปรตีน มีความบริสุทธิเพิ่มขึ้น 25.41 เท่า และให้ผลผลิตเอนไซม์ 185.65 เปอร์เซ็นต์ เมื่อนำไปทดสอบแอคติวิตีหลังจากทำอิเลกโตโฟริซีลแบบ ไม่เสียสภาพด้วยเคซีน 0.5 เปอร์เซ็นต์ พบแทบแอคติวิตีเพียง 1 แทบ และเมื่อนำไปหาน้ำหนักโมเลกุล โดยวิธีเจลฟิลเตรชันโครมาโตกราฟีโดยใช้คอลัมน์ Sephadex G-100 พบว่าขนาดโมเลกุลของเอนไซม์นี้เท่ากับ 21,800 ดาลตัน pH และ อุณหภูมิที่เหมาะสมในการเร่งปฏิกริยาการย่อยสลายเคซีนของโปรติเอสนี้ คือ pH 7.5 และ 65 °ซ ตามลำดับ และมีความเสถียรที่ pH 8.3 และอุณหภูมิ 20-40°ซ จากการศึกษาด้านจลน์ศาสตร์พบว่าเอนไซม์นี้มีค่า Km ต่อ เคซีน BSA และฮีโมโกลบิน เท่ากับ 0.084, 0.161 และ 0.877 เปอร์เซ็นต์โดยน้ำหนัก ตามลำดับ เอนไซม์นี้ มีความจำเพาะต่อสับสเตรตที่เป็นเปปไทด์สังเคราะห์โดยจำเพาะต่อเปปไทด์ด้านคาร์บอกซิลของลิวซีน Mก2-และ Cd2* สามารถยับยั้งแอคติวิตีของเอนไซม์ได้เช่นเดียวกันกับ HgCI2,p-chloromercuricbenzoate และ lodoacetamide ในขณะที่ Na2S2O5 , diithiothetol และ 2-mercaptoethanol จะกระตุ้นแอคติวิตีของเอนไซม์ ผลข้างต้นนี้ ชี้ให้เห็นว่า โปรติเอสจากป่านศรนารายณ์นี้ควรจะเป็น sulfhydryl protease
Other Abstract:	Protease from A. sisalana was partial purified by precipitation by 25-80 % ammoniumsuifete precipitation, Sephadex G-100 column and DEAE -cellulose column chromatography. The purification obtained was 25.41 fold with specific activity of 4.32 Units/mg protein and %yeild of 186.65 %. Activity stain after non- denaturing gel electrophoresis with 0.5% casein as substrate showed a single band The molecular weight of 21,800 was shown with Sephadex G-100 column chromatography. The pH optimum of this enzyme was 7.5 and the temperature optimum was 65 °C, the enzyme was stable at pH 8.3 and 20-40 °C, respectively. The kinetic study of partial purified enzyme showed Km of 0.084, 0.161 and 0.877 % by weight for casein, BSA and hemoglobin respectively. The enzyme also showed specificity towards peptide of G-terminal side of leucine. Mn2-, Cd2+ HgClr p-chloromercuricbenzoate and iodoacetamid could inhibit protease activity while Na2S2O5 , diithiothreitol and 2-mercaptoethanol, activated the enzyme. These results suggested that the enzyme from A. sisalana was sulfhydyl protease
Description:	วิทยานิพนธ์ (วท.ม.)--จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย, 2541
Degree Name:	วิทยาศาสตรมหาบัณฑิต
Degree Level:	ปริญญาโท
Degree Discipline:	ชีวเคมี
URI:	http://cuir.car.chula.ac.th/handle/123456789/72545
URI:	http://doi.org/10.14457/CU.the.1998.147
ISBN:	9743325085
metadata.dc.identifier.DOI:	10.14457/CU.the.1998.147
Type:	Thesis
Appears in Collections:	Grad - Theses

Files in This Item:

File	Description	Size	Format
Sombat_ko_front_p.pdf	หน้าปก และบทคัดย่อ	946.57 kB	Adobe PDF	View/Open
Sombat_ko_ch1_p.pdf	บทที่ 1	1.03 MB	Adobe PDF	View/Open
Sombat_ko_ch2_p.pdf	บทที่ 2	629.39 kB	Adobe PDF	View/Open
Sombat_ko_ch3_p.pdf	บทที่ 3	1.18 MB	Adobe PDF	View/Open
Sombat_ko_ch4_p.pdf	บทที่ 4	1.46 MB	Adobe PDF	View/Open
Sombat_ko_ch5_p.pdf	บทที่ 5	972.83 kB	Adobe PDF	View/Open
Sombat_ko_back_p.pdf	บรรณานุกรม และภาคผนวก	761.92 kB	Adobe PDF	View/Open

Show full item record