การแยก Aureobasidium pullulans ที่สร้างสารต้านเชื้อรา

Abstract

การคัดแยก aureobasidium pullulans จากห้องน้ำในเขตกรุงเทพมหานครและปริมณฑล โดยใช้อาหารสูตร corn meal agar (CMA) และ malt extract agar (MEA) สูตร halt strength และทำการจัดจำแนกเชื้อที่ได้โดยอาศัยลักษณะทางสัณฐานวิทยา ความสามารถในการใช้แหล่งคาร์บอนและไนโตรเจนการผลิต และลักษณะสมบัติของ exopolysaccharide (EPS) ด้วยเทคนิค Infrared spectroscopy พบว่าสามารถคัดแยกเชื้อรา A. pullans ได้จำนวน 10 ไอโซเลต ได้แก่ KT1 BM1 TB1 PH1 JP1 VM1 HKW1 HKW2 HKW3 และ HKW4 จากห้องน้ำในเขตกรุงเทพมหานคร นำเชื้อรา A. pullulans ทั้ง 10 ไอโซเลตมาผลิตสารต้านเชื้อราและทดสอบฤทธิ์ในการต้านเชื้อราก่อโรคในกลุ่ม Aspergillus spp. โดย paper disc method และ conidial germination inhibition assay พบว่าเชื้อรา A. pullulans 4 ไอโซเลต ได้แก่ KT1 BM1 KHW1 และ KHW2 สามารถผลิตสารที่มีฤทธิ์ในการยับยั้งเชื้อรา Aspergillus spp. ได้แตกต่างกันโดยสารสกัดจากทั้ง 4 ไอโซเลตดังกล่าว สามารถยับยั้งเชื้อรา A. terreus ได้ นอกจากนี้พบว่า A. pullulans ไอโซเลต KT1 มีฤทธิ์ในการยับยั้ง A. fumigatus ในขณะที่ A. pullulans ไอโซเลต BM1 สามารถยับยั้ง A. fumigatus และ A. flavus ด้วยเช่นกัน เมื่อนำสารสกัดจาก A. pullulans ทั้ง 4 ไอโซเลตดังกล่าว มาตรวจสอบด้วยเทคนิคโครมาโทรกฟีแบบชั้นบาง (Thin layer chromatography) เปรียบเทียบกับสารต้านเชื้อราออริโอบาซิดิน เอ (aureobasidin A) พบว่าสามารถแยกสารสกัดจาก A. pullulans ทั้ง 4 ไอโซเลต ได้สารหลายชนิดบนแผ่น TLC และมีตำแหน่งของสารที่มีค่า Rf ใกล้เคียงกับออริโอบาซิดิน เอ เมื่อตรวจสอบความสามารถในการต้านเชื้อราของสารที่แยกได้บนแผ่น TLC พบว่า สารสกัดจาก A. pullulans ทั้ง 4 ไอโซเลตดังกล่าว มีสารที่ยับยั้งเชื้อราในตำแหน่งเดียวกันกับออริโอบาซิดินเอ โดยสารสกัดจาก A. pullulans ไอโซเลต KT1 มีสารที่ยับยั้ง A. fumigatus และ A. terreus จำนวน 1ชนิด คือสารที่มีค่า Rf เท่ากับ 0.4 ในขณะที่สารสกัดจาก A.pullulans ไอโซเลต HKW1, HKW2 และ BM1 มีสารที่ยับยั้งเชื้อรา A. terreus จำนวน 1 ชนิด คือสารที่มีค่า Rf เท่ากับ 0.4 นอกจากนั้นสารสกัดจาก A. pullulans ไอโซเลต BM1 ยังมีสารที่ยับยั้ง A. flavus และ A. fumigatus มากกว่า 1 ชนิด คือสารที่มีค่า Rf เท่ากับ 0.4 และ 0.675 ตามลำดับ