การผลิตเอนไซม์ไซโคลนเดกซ์ทรินไกลโคซิลทรานเฟอเรสในถังหมัก และการตรึงเอนไซม์บน Deae เซลลูโลส

Abstract

Bacillus All ผลิตเอนไซม์ไซโคลเดกซ์ทรินไกลโคซึลทรานสเฟอเรส ในปริมาณสูงในอาหารเลี้ยงเชื้อ Horikoshi ที่มีแป้งข้าวเจ้าเป็นแหล่งอาหารคาร์บอน สภาวะที่เหมาะสมในการเลี้ยง Bacillus All ในถังหมักขนาด 5 ลิตร ที่ทำให้ผลิตเอนไซม์ได้ปริมาณสูงสุดคือ เลี้ยงเชื้อที่อุณหภูมิ 37 ° ซ. อัตราการป้อนอากาศ 2 ลิตรต่อนาที และอัตราการกวน 300 รอบต่อนาที หลังจาก pH ของอาหารเลี้ยงเชื้อลดลงประมาณ 1.5-1.6 หน่วยpH Bacillus All จะเริ่มมีการเจริญและผลิตเอนไซม์และมีแอคติวิตีสูงสุดเมื่อเซลล์เข้าสู่ช่วงการเจริญคงที่ หลักจาก pH ของอาหารเลี้ยงเชื้อสูงขึ้นประมาณ 1.0 หน่วยpH รูปแบบการเจริญและการผลิตเอนไซม์นี้คล้ายคลึงกับ Bacillus circulans var. alkalophilus (ATCC 21783) ซึ่งเป็นสายพันธุ์มาตรฐาน จากการทดลองพบว่า สามารถตรึงเอนไซม์ไซโคลเดกซ์ทรินไกลโคซิลทรานสเฟอเรสบน DEAE เซลลูโลส ได้ที่ pH 8.5 ในปริมาณ 500 หน่วยแอคติวิตี/กรัมเรซิน เอนไซม์ที่ถูกตรึงมีสมบัติคล้ายเอนไซม์อิสระคือ มี pH และอุณหภูมิที่เหมาะสมต่อการเร่งปฏิกิริยาอยู่ที่ pH 7.5 และ 60-70 ° ซ. ตามลำดับความเสถียรต่อ pH อยู่ในช่วง 7.5-9.0 และอุณหภูมิถึง 55 ° ซ. สำหรับที่ pH และอุณหภูมิสูงกว่านี้ เอนไซม์ที่ถูกตรึงจะมีความเสถียรมากกว่าเอนไซม์อิสระ การผลิตไซโคลเดกซ์ทรินในถังปฏิกิริยาแบบกวนพบว่า ควรใช้แป้งมีความเข้มข้น 2.5% ถ้าผลิตไซโคลเดกซ์ทริกแบบไม่ต่อเนื่องจะสามารถเปลี่ยนแป้งเป็นไซโคลเดกซ์ทริกได้ 76% ในช่วงเวลา 9 ชั่วโมง และสามารถใช้ซ้ำได้ถึง 6 ครั้งภายใต้สภาวะเดียวกัน ส่วนการผลิตไซโคลเดกซ์ทรินแบบต่อเนื่องโดยให้อัตราการป้อนสับสเตรท 3 มิลลิลิตรต่อชั่วโมงจะสามารถผลิตไซโคลเดกซ์ทรินได้ 72% เป็นเวลา 3 วัน โดยไม่เสริมยาปฏิชีวนะ แต่จะสามารถผลิตได้นานขึ้นเป็นเวลา 10 วัน เมื่อเสริมด้วย streptomycin sulphate