1. CUIR at Chulalongkorn University
  2. Faculty and Institute
  3. Graduate School - Grad
  4. Grad - Theses
Please use this identifier to cite or link to this item: https://cuir.car.chula.ac.th/handle/123456789/31477
Full metadata record
DC FieldValueLanguage
dc.contributor.advisorไพเราะ ปิ่นพานิชการ
dc.contributor.authorอรินทิพย์ ธรรมชัยพิเนต
dc.contributor.otherจุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย. บัณฑิตวิทยาลัย
dc.date.accessioned2013-05-28T08:25:53Z
dc.date.available2013-05-28T08:25:53Z
dc.date.issued2533
dc.identifier.isbn9745778435
dc.identifier.urihttp://cuir.car.chula.ac.th/handle/123456789/31477
dc.descriptionวิทยานิพนธ์ (วท.ม.)--จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย, 2533en
dc.description.abstractได้ทำการโคลนไซแลเนสยีนจาก Streptomyces sp.42-9 โดยใช้ชิ้นส่วนขนาด 5 กิโลเบสของพลาสมิด pIJ699 และพลาสมิด pIJ702 เป็นดีเอนเอพาหะผ่าน S. lividans TK64 ซึ่งเป็นสายพันธุ์มาตรฐาน เข้าสู่ Streptomyces sp.190-1 ทั้งนี้เพราะ S. lividans TK64 มีประสิทธิภาพในการทรานสฟอร์มพลาสมิดพาหะสูงกว่า Streptomyces sp.190-1 ประมาณ 100 เท่า ผลการโคลนโดยใช้ชิ้นส่วนของพลาสมิด pIJ699 เป็นดีเอนเอพาหะ พบว่าได้ 3 โคลนที่มีไซแลเนสแอคติวิตี ซึ่งได้รีคอมบิแนนท์พลาสมิด คือ pPT6C, pPT6E และ pPT6G เมื่อนำเซลล์เจ้าบ้านที่มีพลาสมิดทั้ง 3 นี้ มาเลี้ยงในอาหารเลี้ยงเชื้อที่มีไซแลนเป็นองค์ประกอบ พบว่าเมื่อใช้ S. lividans TK64 เป็นเซลล์เจ้าบ้าน จะได้ไซแลเนสแอคติวิตีเท่ากับ 5.19, 4.85 และ 4.28 หน่วย/มล. ตามลำดับ และเมื่อใช้ Streptomyces sp.190-1 เป็นเซลล์เจ้าบ้าน จะได้ไซแลเนสแอคติวิตีเท่ากับ 2.93, 2.82 และ 2.73 หน่วย/มล. ตามลำดับ จากการหาขนาดของชิ้นส่วนดีเอนเอที่มีไซแลเนสยีนซึ่งใส่เข้าไป (inserted DNA) ในดีเอนเอพาหะในพลาสมิด pPT6C, pPT6E และ pPT6G โดยการทำอิเลคโตรโฟรีซีสบนอะกาโรสเจล พบว่ามีขนาด 4.8, 14.2 และ 9.4 กิโลเบส ตามลำดับ เมื่อใช้ pIJ702 เป็นดีเอนเอพาหะ พบว่าได้ 5 โคลนที่มีไซแลเนสแอคติวิตี ซึ่งได้รีคอมบิแนนท์พลาสมิดคือ pPT7-1, pPT7-2, pPT7-3, pPT7-4 และ pPT7-5 เมื่อนำเซลล์เจ้าบ้านที่มีพลาสมิดทั้ง 5 นี้ มาเลี้ยงในอาหารเลี้ยงเชื้อที่มีไซแลนเป็นองค์ประกอบ พบว่าเมื่อใช้ S. lividans TK64 เป็นเซลล์เจ้าบ้าน จะได้ไซแลเนสแอคติวิตีเท่ากับ 0.79, 0.73, 0.35, 0.32 และ 0.32 หน่วย/มล. ตามลำดับ และเมื่อใช้ Streptomyces sp.190-1 เป็นเซลล์เจ้าบ้าน จะได้ไซแลเนสแอคติวิตีเท่ากับ 3.22, 3.13, 2.73, 1.92 และ 2.32 หน่วย/มล. ตามลำดับ จากการหาขนาดของชิ้นส่วนดีเอนเอที่มีไซแลเนสยีนในพลาสมิด pPT7-1, pPT7-2, pPT7-3, pPT7-4 และ pPT7-5 โดยการทำอิเลคโตรโฟรีซีสบนอะกาโรสเจล พบว่ามีขนาด 0.5, 4.4, 0.5, 6.4 และ 4.4 กิโลเบส ตามลำดับ ผลการโคลนไซแลเนสยีนจาก Streptomyces sp.42-9 ด้วยพลาสมิดพาหะ pIJ699 และ pIJ702 เข้าสู่ Streptomyces sp.190-1 พบว่าสามารถเพิ่มประสิทธิภาพการสร้างไซแลเนสของ Streptomyces sp.190-1 ขึ้นจากเดิม 7-12 นอกจากนั้น Streptomyces sp.190-1 ที่ได้รับพลาสมิดซึ่งมีไซแลเนสยีนยังคงสามารถผลิตกลูโคสไอโซเมอเรสได้ 800-1000 หน่วย/กรัมน้ำหนักเซลล์แห้ง
dc.description.abstractalternativeXylanase gene had been cloned from Streptomyces sp.42-9 through S. lividans TK64, a standard strain, in Streptomyces sp.190-1 by using a 5-Kb fragment of plasmid pIJ699 and plasmid pIJ702 as cloning vectors. S. lividans TK64 was used as an intermediate host cell for this gene cloning because it had approximately 100 folds higher transformation efficiency than that of Streptomyces sp.190-1. Three clones containing xylanase activity were obtained when a 5-Kb fragment from pIJ699 was used as a cloning vector. Recombinant plasmids pPT6C, pPT6E and pPT6G were isolated from these clones. Cultivation of S. lividans TK64 harboring pPT6C, pPT6E and pPT6G in a medium containing xylan yielded 5.19, 4.85 and 4.28 units of xylanase/ml of culture broth, respectively, while using Streptomyces sp.190-1 as a host yielded 2.93, 2.82 and 2.73 units of xylanase/ml, respectively. Size of the inserts in pPT6C, pPT6E and pPT6G were determined by agarose gel electrophoresis to be 4.8, 14.2 and 9.4 Kb, respectively. When pIJ702 was used as a cloning vector, five clones containing xylanase activity were obtained yielding five recombinant plasmids namely, pPT7-1, pPT7-2, pPT7-3, pPT7-4 and pPT7-5. Xylanase activity of S. lividans TK64 harboring pPT7-1, pPT7-2, pPT7-3, pPT7-4 and pPT7-5 when cultivated in xylan containing medium were 0.79, 0.73, 0.35, 0.32 unit/ml, respectively, but when Streptomyces sp.190-1 was used as a host for the corresponding plasmids 3.22, 3.13, 2.73, 1.92 and 2.32 units of xylanase/ml were produced, respectively. Size of the inserts in pPT7-1, pPT7-2, pPT7-3, pPT7-4 and pPT7-5 were determined to be 0.5, 4.4, 0.5, 6.4 and 4.4 Kb, respectively. Cloning of xylanase gene from Streptomyces sp.42-9 by using pIJ699 and pIJ702 as cloning vectors in Streptomyces sp.190-1 could increase xylanase producing ability of Streptomyces sp.190-1 to about 7-12 folds. Furthermore, Streptomyces sp.190-1 harboring plasmids containing xylanase gene were still able to produce about 800-1000 units of glucose isomerase per gram of dried cells.
dc.format.extent6679845 bytes
dc.format.extent6330928 bytes
dc.format.extent7816689 bytes
dc.format.extent14996999 bytes
dc.format.extent5459646 bytes
dc.format.extent9522389 bytes
dc.format.mimetypeapplication/pdf
dc.format.mimetypeapplication/pdf
dc.format.mimetypeapplication/pdf
dc.format.mimetypeapplication/pdf
dc.format.mimetypeapplication/pdf
dc.format.mimetypeapplication/pdf
dc.language.isothes
dc.publisherจุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัยen
dc.rightsจุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัยen
dc.titleโคลนิงและการแสดงออกของไซแลเนสยีนจาก Streptomyces sp.42-9 ใน Streptomyces sp.190-1en
dc.title.alternativeCloning and exprression of xylanase gene from streptomyces sp.42-9 in streptomyces sp.190-1en
dc.typeThesises
dc.degree.nameวิทยาศาสตรมหาบัณฑิตes
dc.degree.levelปริญญาโทes
dc.degree.disciplineจุลชีววิทยาes
dc.degree.grantorจุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัยen
Appears in Collections:Grad - Theses

Files in This Item:
File Description SizeFormat 
Arinthip_th_front.pdf6.52 MBAdobe PDFView/Open
Arinthip_th_ch1.pdf6.18 MBAdobe PDFView/Open
Arinthip_th_ch2.pdf7.63 MBAdobe PDFView/Open
Arinthip_th_ch3.pdf14.65 MBAdobe PDFView/Open
Arinthip_th_ch4.pdf5.33 MBAdobe PDFView/Open
Arinthip_th_back.pdf9.3 MBAdobe PDFView/Open
Show simple item record


Items in DSpace are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.