Please use this identifier to cite or link to this item:
https://cuir.car.chula.ac.th/handle/123456789/6778
| Title: | การผลิต wavelengthgt 11 DNA และ In vitro packaging mixes เพื่อใช้ในงานพันธุวิศวกรรม |
| Other Titles: | Wavelength 11 DNA and in vitro packaging mixes productions for using in genetic engineering work |
| Authors: | นภา ศิวรังสรรค์ |
| Email: | Napa.S@chula.ac.th |
| Other author: | จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย. คณะวิทยาศาสตร์ |
| Subjects: | พันธุวิศวกรรม |
| Issue Date: | 2536 |
| Publisher: | จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย |
| Abstract: | งานวิจัยนี้มีจุดประสงค์ที่จะผลิต lambda gt 11 DNA จากเชื้อ E. coli BNN 97 โดยการเหนี่ยวนำให้เชื้อเกิด lysis ที่อุณหภูมิ 45 C จากนั้นนำ Bacteriophage lambda gt 11 มาบุกรุกเซลล์ให้อาศัย E. coli Y 1088 จะสามารถขยายจำนวน Bacteriophage ให้มากขึ้นก่อนที่จะทำการแยก lambda gt 11 DNA แบบเสกลเล็ก (Requena 1993) และแบบขยายส่วน (Maniatis 1982) ปริมาณ lambda gt 11 DNA ที่แยกได้จากแต่ละวิธีขึ้นอยู่กับจำนวน pfu ของ lambda gt 11 ที่ใช้ในการบุกรุกเซลล์ให้อาศัย ผลการทดลองพบว่า เมื่อใช้ lambda gt 11 จำนวน 5 x 10[superscript 5] pfu บุกรุกเซลล์ให้อาศัย จะสามารถแยก lambda gt 11 DNA แบบเสกลเล็กได้ทั้งหมดเท่ากับ 7.93 มิลลิกรัม และเมื่อใช้ lambda gt 11 จำนวน 10[superscript 4] pfu บุกรุกเซลล์ให้อาศัย จะสามารถแยก lambda gt 11 DNA แบบขยายส่วนได้ทั้งหมดเท่ากับ 0.25 มิลลิกรัม อย่างไรก็ตาม lambda gt 11 DNA ที่เตรียมแบบเสกลเล็กยังปนเปื้อนด้วย chromosomal DNA ของเซลล์ให้อาศัย นอกจากนี้งานวิจัยยังมีความประสงค์ที่จะผลิต In vitro packaging mixes จากเชื้อ E. coli BHB 2688 และ E. coli BHB 2690 ตามวิธีของ Maniatis (1982) เพื่อนำมาเตรียม Freeze thaw lysate และ Sonic extract ตามลำดับ เมื่อนำ In vitro packaging mixes มาทดสอบประสิทธิภาพของการ packaging กับ lambda gt 11 DNA ที่แยกได้ ผลการทดลองพบว่าได้จำนวน Bacteriophage 1.48 x 10[superscript 11] pfu/microgram DNA |
| Other Abstract: | The objective of this work was to produce lambda gt 11 DNA from E. coli BNN97 by inducing cell lysis at 45 C. The number of lambda gt 11 was amplified by infecting E. coli Y 1088 host cells. The lambda gt 11 DNA was isolated from the infected host cells by both small scale method (Requena 1993) and large scale method (Maniatis 1982). The amount of isolated lambda gt 11 DNA from each method depended on the plaque forming units of lambda gt 11 which was used to infect host cells. The total amount of lambda gt 11 DNA isolated from 5 x 10[superscript 5] pfu of lambda gt 11 infected host cells on small scale method was 7.93 mg. And the total amount of lambda 11 DNA isolated from 10[superscript 4] pfu of lambda gt 11 infected host cells on large scale method was 0.25 gm. However, lambda gt 11 DNA prepared by small scale method contained host chromosomal DNA. The other objective of this work was to produce in vitro packging mixes from E. coli BHB 2688 and E. coli BHB 2690 by the method of Maniatis (1982) for the preparation of freeze thaw lysate and sonic extract, respectively. The packaging efficiency of the prepared in vitro packaging mixes was tested with the isolated lambda gt 11 DNA. The number of bacteriophage of 1.48 x 10[superscript 11] pfu/microgram DNA was obtained from this system. |
| Description: | ผู้ร่วมวิจัย: จันทร์ทิพย์ เหล่าฤทธิรัตน์ , ดวงพร สัหนันทวงศ์ |
| URI: | http://cuir.car.chula.ac.th/handle/123456789/6778 |
| Type: | Technical Report |
| Appears in Collections: | Sci - Research Reports |
Files in This Item:
| File | Description | Size | Format | |
|---|---|---|---|---|
| Napa(DNA).pdf | 6.03 MB | Adobe PDF | View/Open |
Items in DSpace are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.