Please use this identifier to cite or link to this item: https://cuir.car.chula.ac.th/handle/123456789/73947
Full metadata record
DC FieldValueLanguage
dc.contributor.advisorเปี่ยมสุข พงษ์สวัสดิ์-
dc.contributor.authorอุดมลักษณ์ ธิติรักษ์พาณิชย์-
dc.contributor.otherจุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย. บัณฑิตวิทยาลัย-
dc.date.accessioned2021-06-22T01:22:07Z-
dc.date.available2021-06-22T01:22:07Z-
dc.date.issued2534-
dc.identifier.isbn9745794368-
dc.identifier.urihttp://cuir.car.chula.ac.th/handle/123456789/73947-
dc.descriptionวิทยานิพนธ์ (วท.ม.)--จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย, 2534-
dc.description.abstractทำการแยกเอนไซม์นิวทรัลโปรตีเอสจาก Bacillus subtilis TISTR 25 ให้บริสุทธิ์โดยการตกตะกอน ด้วยแอมโมเนียมซัลเฟตอิ่มตัว 40 - 70% แล้วผ่านคอลัมน์โครมาโตรกราฟฟี 2 ชนิด คือ ซีเอ็ม เซลลูโลส และ เซฟา เด็กซ์ จี 75 สามารถแยกเอนไซม์นิวทรัลโปรตีเอสให้มีความบริสุทธิ์เพิ่มขึ้น 4.6 เท่า ทดสอบความบริสุทธิ์โดยเทคนิค โพลีอะไครลาไมด์ เจล อิเลคโตรโฟรีซิสได้แถบโปรตีนเพียงแถบเดียว นำไปหาขนาดและหน่วยย่อยของเอนไซม์ โดยวิธี เอสดีเอส โพลีอะไครลาไมด์ เจล อิเลคโตรโฟรีซีส พบว่าเอนไซม์ เป็นโพลีเปปไทด์สายเดี่ยว มีขนาดโมเลกุล 37,000 ดาลตัน สภาวะที่เหมาะสมในการเร่งปฏิกิริยาการย่อยสลายเคซีนดีที่สุดที่ pH.7 และอุณหภูมิ 50 °ซ. เอนไซม์ ที่ทำให้บริสุทธิ์นี้ไม่สามารถย่อยสลายพันธะเอสเทอร์ได้ และจากการศึกษาค่าคงที่ทางจลศาสตร์ของเอนไซม์ (Kₘ)ต่อลับสเตรท เคซีน ฮีโมโกลบิน และ เอโซคอล มีค่าเท่ากับ 0.04, 0.06 มิลลิโมล/ลิตร และ 10 มก. / มล. ตามลำดับ ซึ่งทำการทดลองเปรียบเทียบกับเอนไซม์ Thermolysin จาก B. thermoproteolyticus พบว่า Thermolysin มีความจำเพาะต่อลับสเตรททั้งสามชนิดดีกว่าเอนไซม์ที่ทำให้บริสุทธิ์จาก TISTR 25 แต่เอนไซม์จาก TISTR 25 มีความเร็วสูงสุด (Vₘₐₓ) ในการเร่งปฏิกิริยาลับสเตรททั้งสามชนิดนี้ดีกว่า Thermolysin และเมื่อศึกษาความจำเพาะต่อลับสเตรทที่เป็นเปปไทด์สังเคราะห์ พบว่านิวทรัลโปรตีเอสจาก TISTR 25 สามารถย่อยลับสเตรทที่มีขนาดตั้งแต่ tripeptide ขึ้นไป และมีความจำเพาะต่อปลายด้าน N ของกรดอะมิโนะขนาดใหญ่ เช่น ลิวซีน, ฟินิลอะลานีน หรือ อาร์จินิน เช่นเดียวกับเอนไซม์ Thermolysin เอนไซม์นิวทรัลโปรตีเอสจาก B. subtilis TISTR 25 มีปริมาณอะตอมสังกะสีในโมเลกุลเท่ากับ 1.5 อะตอม / โมเลกุล เอนไซม์ถูกยับยั้งปฏิกิริยาได้ด้วยสารคีเลตติ้ง EDTA และ Phenanthroline จากการทดลองใช้ EDTA ที่ความเข้มข้น 1 มิลลิโมลาร์ สามารถยับยั้งปฏิกิริยาประมาณ 80% และแอดติวิดีจะ กลับคืนได้ถ้ามีการเติมไดวาเลนท์ที่เหมาะสม ซึ่งจากการทดลองพบว่าเมื่อมีการเติม 1 มิลลิโมลาร์ของ Zn⁺⁺ , Mn⁺⁺ และ Co⁺⁺ แอคติวิดีจะสามารถกลับคืนมาได้ดีกว่าเมื่อเติม 1 มิลลิโมลาร์ของ Ca⁺⁺ , Fe⁺⁺ และ Mg⁺⁺-
dc.description.abstractalternativeNeutral protease from Bacillus subtilis TISTR 25 was purified 4.6 fold by using ammonium sulfate precipitation, CM-cellulose and Sephadex G-75 colum chromatography, respectively. The enzyme was highly purified and showed one band on polyacrylamide gel electrophoresis. The purified enzyme was proved to be a monomer with a molecular weight of 37,000 by SDS polyacrylamide gel electrophoresis. The optimum pH and the optimum temperature were 7 and 50℃. There was no esterase activity. Michaelis constant (K) for casein, hemoglobin and azocoll were 0.04, 0.06 mM and 10 mg/ml, respectively. Comparative studies with Thermolysin indicated that the purified enzyme has lower affinity but greater maximum velocity (Vmax) for these 3 substrates. The enzyme showed similar specificity with Thermolysin towards synthetic substrated. They hydrolysed peptide bonds at the amino end of bulky amino acids such as Leucine, phenylalanine and Arginine. The zinc content of neutral protease from B. subtilis TISTR 25 was approximately 1.5 atom/molecule enzyme. The enzyme was inactivated by chelating agents EDTA and Phenanthroline. Eighty percent of the enzyme was inactivated by 1 mM EDTA. The inactive enzyme could be better reactivated by the addition of 1 mM, Zn⁺⁺ , Mn⁺⁺ or Co⁺⁺ than Ca⁺⁺ , Fe⁺⁺ or Mg⁺⁺.-
dc.language.isoth-
dc.publisherจุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย-
dc.rightsจุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย-
dc.subjectเอนไซม์โปรติเอส -- การทำให้บริสุทธิ์-
dc.subjectบาซิลลัสซับทิลิส-
dc.subjectProteolytic enzymes -- Purification-
dc.subjectBacillus subtilis-
dc.titleการทำให้บริสุทธิ์และการศึกษาสมบัติของเอนไซม์นิวทรัลโปรตีเอส จาก Bacillus subtilis TISTR 25-
dc.title.alternativePurification and characterization of neutral protease from bacillus subtilis TISTR 25-
dc.typeThesis-
dc.degree.nameวิทยาศาสตรมหาบัณฑิต-
dc.degree.levelปริญญาโท-
dc.degree.disciplineชีวเคมี-
dc.degree.grantorจุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย-
Appears in Collections:Grad - Theses

Files in This Item:
File Description SizeFormat 
Udomluck_th_front_p.pdf1.17 MBAdobe PDFView/Open
Udomluck_th_ch1_p.pdf1.33 MBAdobe PDFView/Open
Udomluck_th_ch2_p.pdf724.72 kBAdobe PDFView/Open
Udomluck_th_ch3_p.pdf1.39 MBAdobe PDFView/Open
Udomluck_th_ch4_p.pdf2.12 MBAdobe PDFView/Open
Udomluck_th_ch5_p.pdf1.44 MBAdobe PDFView/Open
Udomluck_th_back_p.pdf928.17 kBAdobe PDFView/Open


Items in DSpace are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.