สภาวะที่เหมาะสมในการแสดงออกของโปรตีนออสที่โอพอนทินในต้นยาสูบ

Abstract

ออสทีโอพอนทินเป็นโปรตีนชนิดหนึ่งที่สามารถทำหน้าที่เป็นโมเลกุลให้สัญญาณ (Ssignaling molecules) ในเทคนิควิศวกรรมเนื้อเยื่อ (tissue engineering) โดยมีบทบาทเกี่ยวกับการสร้างและ เกิดใหม่ของเนื้อเยื่อกระดูก จากการศึกษาที่ผ่านมาพบว่าออสทีโอพอนทินที่ผลิตจากต้นยาสูบ Nicotiana benthamiana สามารถกระตุ้นยีนส์ที่เกี่ยวข้องกับกระบวนการ bone remodeling ได้ นอกจากนี้ยังมีการศึกษาการผลิตออสทีโอพอนทินโดยปรับปรุงชิ้นส่วนของยีนส์ให้เหลือเฉพาะส่วน ของ C-terminal และนำไปทดสอบกับเซลล์เอ็นยึดปริทันต์ ผลปรากฎว่าออสทีโอพอนทินส่วน C-terminal สามารถกระตุ้นยีนส์ที่เกี่ยวข้องกับกระบวนการ bone remodeling ได้ดีกว่าออสทีโอ พอนทินส่วนอื่นๆ งานวิจัยนี้มีวัตถุประสงค์เพื่อศึกษาสภาวะที่เหมาะสมในการผลิตโปรตีนออสทีโอ พอนทินส่วน C-terminal ในต้นยาสูบ โดยใช้ Agrobacterium tumefaciens สายพันธุ์ GV3101 ที่ มีพลาสมิด p BYR2eK2Md-C-OPN-His มาศึกษาผลของความเข้มข้นของเชื้อที่ใช้ในการฉีดเข้าใบของ ต้นยาสูบ ซึ่งศึกษาที่ OD600 = 0.2, 0.4, 0.6 และ 0.8 โดยทำการศึกษาเป็นเวลา 6 วัน (1-6 dpi) หลังทำการฉีดเชื้อ นำใบไม้มาสกัดและวิเคราะห์ปริมาณโปรตีนด้วยเทคนิค western blot จาก การศึกษาพบว่า สภาวะที่เหมาะสมที่สุดในการผลิตโปรตีนออสทีโอพอนทินส่วน C-terminal ในต้น ยาสูบคือใช้ความเข้มข้นของเชื้อที่ 0D600 - 0.4 โดยเก็บใบหลังจากฉีดเป็นเวลา 3 วัน (3 dpi)